作者iwenyo2 (柚子)
看板Medicine
標題[問題] TA cloning
時間Tue Aug 17 23:08:11 2010
最近利用commerial的TA cloning
將需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後
切膠純化後 做A- tailing
以kit ligation transform 至DH5a
隔天長出colony 以colony PCR 後得到我想要的產物(~400bp)
但clony養liquid 抽plasmid run PCR 後卻發現
除了目標產物外 有一個很大的band (>3K)
想請問 那個band 雜band嗎? 為什麼colony PCR 跟plasmid DNA PCR 結果會有差異??
麻煩了
感謝!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.160
1F：→ ray289:TA後的plasmid多大? 取了多少量的plasmid去做PCR? 08/17 23:48
2F：→ boxiaokai:抽完plasmid之後用restriction enzyme check比較好 08/26 18:39
3F：→ boxiaokai:有時候colony PCR會有false positive的情況 08/26 18:39
4F：→ boxiaokai:至於你說的比3K大的產物 你elongation time多久? 08/26 18:41
5F：→ boxiaokai:我推測可能是你elongation time過久 P了一圈 08/26 18:41
6F：→ boxiaokai:另外也有可能你下了太多template 看到的是你的plasmid 08/26 18:42