作者iwenyo2 (柚子)
看板Medicine
标题[问题] TA cloning
时间Tue Aug 17 23:08:11 2010
最近利用commerial的TA cloning
将需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後
切胶纯化後 做A- tailing
以kit ligation transform 至DH5a
隔天长出colony 以colony PCR 後得到我想要的产物(~400bp)
但clony养liquid 抽plasmid run PCR 後却发现
除了目标产物外 有一个很大的band (>3K)
想请问 那个band 杂band吗? 为什麽colony PCR 跟plasmid DNA PCR 结果会有差异??
麻烦了
感谢!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.160
1F：→ ray289:TA後的plasmid多大? 取了多少量的plasmid去做PCR? 08/17 23:48
2F：→ boxiaokai:抽完plasmid之後用restriction enzyme check比较好 08/26 18:39
3F：→ boxiaokai:有时候colony PCR会有false positive的情况 08/26 18:39
4F：→ boxiaokai:至於你说的比3K大的产物 你elongation time多久? 08/26 18:41
5F：→ boxiaokai:我推测可能是你elongation time过久 P了一圈 08/26 18:41
6F：→ boxiaokai:另外也有可能你下了太多template 看到的是你的plasmid 08/26 18:42