※ 引述《HIbaby (燃燒吧! 嗨~北鼻!)》之銘言： : ※ 引述《cytospin (無心)》之銘言： : : 我之前有想過 另外一個lab的人其實也有做過 : : 可是因為 HDACi 影響很多基因表現 : : 我們使用的construct in vivo and in vitro都會upregulate after HDACi TRT : : 基本上這樣就不是一個很好的reporter的方式 : : 所以舉凡paper就算做小老鼠也還真少人用這個當marker : : 因為他會影響(upregulate) 表現 : : 所以反而就有人反其道而行 利用這個特性然後做其他實驗去了... : 謝謝您的回答 ^^ : 另外, 我在biotech板上有看到你在做癌症轉移 : 小弟目前有個轉錄因子 我在猜他可能會影響癌症轉移 : 想問一下, 如我要去嘗試, 你可以推薦幾個實驗 或是 觀察marker 嗎? : 我的初步構想是, 這個分子過量表現在cancer cell line : 這個cell line會改變形態, 然後降低 e-cadherin? 等 或是提高mmp之類的 : 但是我不知道一般人怎麼做 : 另外, 這個因子受TGF-beta誘導表現... 不知道你有何好建議? : ^^ 感謝.. ㄟ 諮詢費先拿來(伸) 不然你的paper我要掛名...哈哈哈 癌症轉移那是我突發奇想的小計畫 自己都快掰不下去了 好吧那我就對你做的給點微弱的建議 不過不知道你的程度在那兒 重點就是多看看別人怎麼做實驗 自己先想一下 這樣對你的邏輯思考比較有幫助.... 我只給大方向囉 1. 如果你覺得這東西over expression in common cancer cell lines 有空就先做一些screen. 最簡單但是很貴的方法就做tissue array 做一些TGFb 刺激然後up regulate 這個TF -->此時可做Western 或者做個confocal 看TF translocation囉 --> 把現有的細胞invasion comparison --> correlate invasion vs TF expression level + E-cad+MMP 2. 然後找個細胞transfect 這個TF讓他overexpress (很多人都選3t3)_ 然後TGFb刺激也可以當做一個CTR -->因為他會upregulate as well 然後就比較這三組的差異囉 包含biology and your possible targets -->比如說 migration, invasion(Matrigel) -->如果是attach cell還可以做wound healing assay --> 測target change--> MMP (zymograph or ELISA), Western E-cad --> 可以做EMSA 看你的TF會不會bind到上述兩個gene 的promotor上 --> 照個照片做morphology變化 3. screen的時候找一些較高表現和滴表現的 --> RNAi 降低那個TF 看是否就能抑制invasion + Ecad+MMP ㄟ 這樣應該就夠你做很久了.... --

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