※ 引述《HIbaby (燃烧吧! 嗨~北鼻!)》之铭言： : ※ 引述《cytospin (无心)》之铭言： : : 我之前有想过 另外一个lab的人其实也有做过 : : 可是因为 HDACi 影响很多基因表现 : : 我们使用的construct in vivo and in vitro都会upregulate after HDACi TRT : : 基本上这样就不是一个很好的reporter的方式 : : 所以举凡paper就算做小老鼠也还真少人用这个当marker : : 因为他会影响(upregulate) 表现 : : 所以反而就有人反其道而行 利用这个特性然後做其他实验去了... : 谢谢您的回答 ^^ : 另外, 我在biotech板上有看到你在做癌症转移 : 小弟目前有个转录因子 我在猜他可能会影响癌症转移 : 想问一下, 如我要去尝试, 你可以推荐几个实验 或是 观察marker 吗? : 我的初步构想是, 这个分子过量表现在cancer cell line : 这个cell line会改变形态, 然後降低 e-cadherin? 等 或是提高mmp之类的 : 但是我不知道一般人怎麽做 : 另外, 这个因子受TGF-beta诱导表现... 不知道你有何好建议? : ^^ 感谢.. ㄟ 谘询费先拿来(伸) 不然你的paper我要挂名...哈哈哈 癌症转移那是我突发奇想的小计画 自己都快掰不下去了 好吧那我就对你做的给点微弱的建议 不过不知道你的程度在那儿 重点就是多看看别人怎麽做实验 自己先想一下 这样对你的逻辑思考比较有帮助.... 我只给大方向罗 1. 如果你觉得这东西over expression in common cancer cell lines 有空就先做一些screen. 最简单但是很贵的方法就做tissue array 做一些TGFb 刺激然後up regulate 这个TF -->此时可做Western 或者做个confocal 看TF translocation罗 --> 把现有的细胞invasion comparison --> correlate invasion vs TF expression level + E-cad+MMP 2. 然後找个细胞transfect 这个TF让他overexpress (很多人都选3t3)_ 然後TGFb刺激也可以当做一个CTR -->因为他会upregulate as well 然後就比较这三组的差异罗 包含biology and your possible targets -->比如说 migration, invasion(Matrigel) -->如果是attach cell还可以做wound healing assay --> 测target change--> MMP (zymograph or ELISA), Western E-cad --> 可以做EMSA 看你的TF会不会bind到上述两个gene 的promotor上 --> 照个照片做morphology变化 3. screen的时候找一些较高表现和滴表现的 --> RNAi 降低那个TF 看是否就能抑制invasion + Ecad+MMP ㄟ 这样应该就够你做很久了.... --

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