※ 引述《metalbi (真有趣)》之銘言： : 收蛋白的步驟用的buffer有哪些 : 我的方法有兩種 : ㄧ種是用sampling buffer : 另依種是除了sampling buffer以外還有lysis buffer : 請問這兩種萃取法有差嗎?? : 因為我查了我們實驗室的lysis buffer的配方 : 裡面竟然還有phosphatase inhibitor : 不知道是否會將蛋白質的phosphatase都抑制掉了 : 這樣對於實驗結果會有差耶!! : 煩請大家解答 收蛋白 (萃取蛋白) 首先要看你是用什麼細胞， 植物跟動物跟細菌都不太一樣。 所謂 lysis buffer 裡頭可能含有一些 detergent 或是 enzyme 前者打破細胞膜，後者打破細胞壁 (像植物或是細菌) 至於 buffer 系統，PBS、Tris、Tricine、HEPES 很多種， 除非特別用途，否則都差不多，就看習慣了。 小結一下，lysis buffer 裡頭含有 1. buffer system 主要維持 pH 穩定 (細胞內很多 pH 很極端的胞器) 2. protease inhibitor (防止蛋白質被分解) 3. phosphatase inhibitor (防止磷酸化的蛋白被分解，非必要，看實驗) 4. detergent (打破細胞膜，或是萃取膜蛋白) 有 ionic 與 non-ionic 的兩種，前者常用如 Triton X-100、NP-40 後者如 deoxycholate 5. enzyme (看要做啥就放啥，去 DNA 還是去掉特定蛋白，或是打破細胞壁) 說實在其實 lysis buffer 是個很廣義的名詞，只要以上的元素就算是， 至於元素怎麼選擇，每個實驗室甚至每次實驗可能都不一樣。 另外你所謂 sampling buffer 我想應該就是 sample buffer， 這個定義跟配方就比較統一了。 Sample buffer 又稱為 Laemmli buffer，是 1970 年發在 Nature 上的一篇文章其作者的名字。本篇作者發明了 SDS-PAGE，首度使用 Stacking gel 跟 Running gel 的系統，配合上經過 sample buffer 處理的蛋白質樣品，可以得到很好的分離效果，我們現在用的方法， 就是那時候的，配方都沒有變過。 可參考如下： Laemmli UK (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680–85. Sample buffer 裡頭一樣有 detergent (SDS)，有些人會直接拿這個 buffer 來萃取蛋白質，不過因為 sample buffer 內含 glycerol (為了讓 loading 的時候蛋白質會沉在 well 裡)，整個黏呼呼的。 不一定適合所以萃取方式。 總結，反正要萃取蛋白質不外乎 buffer、protease inhibitor (必要) 另外再加 detergent，沒有 detergent 就用液態氮直接打破它。 其它加進去的，大多是實驗上有其他用途才會加。 所以建議你可以仔細想想你們實驗室的 protocol 都是拿來做什麼的， 或是問問學長姐比較快喔。 --

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