※ 引述《metalbi (真有趣)》之铭言： : 收蛋白的步骤用的buffer有哪些 : 我的方法有两种 : ㄧ种是用sampling buffer : 另依种是除了sampling buffer以外还有lysis buffer : 请问这两种萃取法有差吗?? : 因为我查了我们实验室的lysis buffer的配方 : 里面竟然还有phosphatase inhibitor : 不知道是否会将蛋白质的phosphatase都抑制掉了 : 这样对於实验结果会有差耶!! : 烦请大家解答 收蛋白 (萃取蛋白) 首先要看你是用什麽细胞， 植物跟动物跟细菌都不太一样。 所谓 lysis buffer 里头可能含有一些 detergent 或是 enzyme 前者打破细胞膜，後者打破细胞壁 (像植物或是细菌) 至於 buffer 系统，PBS、Tris、Tricine、HEPES 很多种， 除非特别用途，否则都差不多，就看习惯了。 小结一下，lysis buffer 里头含有 1. buffer system 主要维持 pH 稳定 (细胞内很多 pH 很极端的胞器) 2. protease inhibitor (防止蛋白质被分解) 3. phosphatase inhibitor (防止磷酸化的蛋白被分解，非必要，看实验) 4. detergent (打破细胞膜，或是萃取膜蛋白) 有 ionic 与 non-ionic 的两种，前者常用如 Triton X-100、NP-40 後者如 deoxycholate 5. enzyme (看要做啥就放啥，去 DNA 还是去掉特定蛋白，或是打破细胞壁) 说实在其实 lysis buffer 是个很广义的名词，只要以上的元素就算是， 至於元素怎麽选择，每个实验室甚至每次实验可能都不一样。 另外你所谓 sampling buffer 我想应该就是 sample buffer， 这个定义跟配方就比较统一了。 Sample buffer 又称为 Laemmli buffer，是 1970 年发在 Nature 上的一篇文章其作者的名字。本篇作者发明了 SDS-PAGE，首度使用 Stacking gel 跟 Running gel 的系统，配合上经过 sample buffer 处理的蛋白质样品，可以得到很好的分离效果，我们现在用的方法， 就是那时候的，配方都没有变过。 可参考如下： Laemmli UK (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680–85. Sample buffer 里头一样有 detergent (SDS)，有些人会直接拿这个 buffer 来萃取蛋白质，不过因为 sample buffer 内含 glycerol (为了让 loading 的时候蛋白质会沉在 well 里)，整个黏呼呼的。 不一定适合所以萃取方式。 总结，反正要萃取蛋白质不外乎 buffer、protease inhibitor (必要) 另外再加 detergent，没有 detergent 就用液态氮直接打破它。 其它加进去的，大多是实验上有其他用途才会加。 所以建议你可以仔细想想你们实验室的 protocol 都是拿来做什麽的， 或是问问学长姐比较快喔。 --

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