作者Lbojay (人魚線不是最難練的...)
看板ChineseMed
標題[請益] 請問有人在做中草藥關於美白檢測實驗嗎?
時間Sun Oct 13 21:01:09 2013
不知道適合在這邊問嗎?
有人在做關於中草藥抑制酪胺酸脢的實驗嗎?
我一直做失敗~(條件都一樣,PBS也設定成一倍,酵素也溶在PBS裡)
能注意的地方目前應該都有注意到~希望有經驗的前輩能給予指導感恩!!!
補充實驗的條件內容:
處理組(萃取液)(B):萃取液100ul,磷酸緩衝溶液90ul,
0.03%酪胺酸溶液100μl, 酪胺酸脢水溶液10μl。
空白組(Bo):100ul,磷酸緩衝溶液190μl,酪胺酸脢水溶液10μl。
對照組(A)：步驟與處理組相同，但以等體積的萃取液所使用的溶劑取代萃取液。
總體積共300μl:(因用水萃,故此時使用Ro水)Ro water 100μl,磷酸緩衝溶液90ul,0.03%
酪胺酸溶液100μl, 酪胺酸脢水溶液10μl。
總空白組(Ao):
步驟與處理組相同，但以等體積的萃取液所使用的溶劑取代萃取液，以等體積的磷酸緩衝
溶液取代酪胺酸脢溶液。
總體積共300μl:(因用水萃,故此時使用Ro水)Ro water 100μl,磷酸緩衝溶液190μl, 酪
胺酸脢水溶液10μl。
先於96-well中混和，並置於37℃培養箱中10mins，
再加入10μl的酪胺酸脢水溶液，將溶液混和均勻，置於37℃培養箱中反應25mins，
以紫外光光譜儀測定475 nm時的吸收值。
流程方式如上~可是測出來的清除率總是波動很大,正好幾百到負好幾百都有><
不知道是哪邊沒有注意到嗎?(酵素方面?PBS方面?)或者是哪兒是沒有去顧慮到的呢?
謝謝!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.192.136.117
1F：推 ellisnieh:用到PBS是細胞實驗？實驗流程都沒有，直接這樣問，最好 10/13 21:44
2F：→ ellisnieh:是有人答得出來啦……你的條件一樣是跟哪篇paper一樣、 10/13 21:45
3F：→ ellisnieh:萃取物品項、濃度等等啥都沒有……有指導的老師或實驗室 10/13 21:46
4F：→ ellisnieh:的話去問指導者，不然去找有做細胞的實驗室吧。這應該不 10/13 21:48
5F：→ ellisnieh:是很深的實驗，滿多地方都有實驗室在做。 10/13 21:48
※ 編輯: Lbojay 來自: 123.192.136.117 (10/14 06:22)
6F：推 ellisnieh:所以是再現性做不出來的意思？如果同一批樣品測過兩次以 10/14 15:24
7F：→ ellisnieh:上確認不是光譜儀或光譜儀操作問題，還有可能是實驗材料 10/14 15:25
8F：→ ellisnieh:問題。除非你的材料來源很穩定，不然最好是同一批原料來 10/14 15:25
9F：→ ellisnieh:做三重複──不過正負亂跳也有點誇張就是。開頭結尾都沒 10/14 15:26
10F：→ ellisnieh:問題還做不出來的話，就得檢查是不是還有操作失誤沒注意 10/14 15:26
11F：推 linnalin:你的pipetman用的準嗎?.. 10/15 04:55
12F：推 linnalin:拿材料做一條檢量線試試 做不出來或不漂亮就是技術問題 10/15 04:58