作者Lbojay (人鱼线不是最难练的...)
看板ChineseMed
标题[请益] 请问有人在做中草药关於美白检测实验吗?
时间Sun Oct 13 21:01:09 2013
不知道适合在这边问吗?
有人在做关於中草药抑制酪胺酸脢的实验吗?
我一直做失败~(条件都一样,PBS也设定成一倍,酵素也溶在PBS里)
能注意的地方目前应该都有注意到~希望有经验的前辈能给予指导感恩!!!
补充实验的条件内容:
处理组(萃取液)(B):萃取液100ul,磷酸缓冲溶液90ul,
0.03%酪胺酸溶液100μl, 酪胺酸脢水溶液10μl。
空白组(Bo):100ul,磷酸缓冲溶液190μl,酪胺酸脢水溶液10μl。
对照组(A)：步骤与处理组相同，但以等体积的萃取液所使用的溶剂取代萃取液。
总体积共300μl:(因用水萃,故此时使用Ro水)Ro water 100μl,磷酸缓冲溶液90ul,0.03%
酪胺酸溶液100μl, 酪胺酸脢水溶液10μl。
总空白组(Ao):
步骤与处理组相同，但以等体积的萃取液所使用的溶剂取代萃取液，以等体积的磷酸缓冲
溶液取代酪胺酸脢溶液。
总体积共300μl:(因用水萃,故此时使用Ro水)Ro water 100μl,磷酸缓冲溶液190μl, 酪
胺酸脢水溶液10μl。
先於96-well中混和，并置於37℃培养箱中10mins，
再加入10μl的酪胺酸脢水溶液，将溶液混和均匀，置於37℃培养箱中反应25mins，
以紫外光光谱仪测定475 nm时的吸收值。
流程方式如上~可是测出来的清除率总是波动很大,正好几百到负好几百都有><
不知道是哪边没有注意到吗?(酵素方面?PBS方面?)或者是哪儿是没有去顾虑到的呢?
谢谢!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.192.136.117
1F：推 ellisnieh:用到PBS是细胞实验？实验流程都没有，直接这样问，最好 10/13 21:44
2F：→ ellisnieh:是有人答得出来啦……你的条件一样是跟哪篇paper一样、 10/13 21:45
3F：→ ellisnieh:萃取物品项、浓度等等啥都没有……有指导的老师或实验室 10/13 21:46
4F：→ ellisnieh:的话去问指导者，不然去找有做细胞的实验室吧。这应该不 10/13 21:48
5F：→ ellisnieh:是很深的实验，满多地方都有实验室在做。 10/13 21:48
※ 编辑: Lbojay 来自: 123.192.136.117 (10/14 06:22)
6F：推 ellisnieh:所以是再现性做不出来的意思？如果同一批样品测过两次以 10/14 15:24
7F：→ ellisnieh:上确认不是光谱仪或光谱仪操作问题，还有可能是实验材料 10/14 15:25
8F：→ ellisnieh:问题。除非你的材料来源很稳定，不然最好是同一批原料来 10/14 15:25
9F：→ ellisnieh:做三重复──不过正负乱跳也有点夸张就是。开头结尾都没 10/14 15:26
10F：→ ellisnieh:问题还做不出来的话，就得检查是不是还有操作失误没注意 10/14 15:26
11F：推 linnalin:你的pipetman用的准吗?.. 10/15 04:55
12F：推 linnalin:拿材料做一条检量线试试 做不出来或不漂亮就是技术问题 10/15 04:58