作者ankara2 (ankara)
看板Chemistry
標題[實驗] HPLC 壓力問題
時間Sun Feb 4 11:52:14 2018
各位前輩大家好~
小妹最近剛學HPLC，遇到問題所以來這發問。
儀器：Agilent 1100
column：C18，非極性逆向(250 mm x 4.6 mm)
第一次自己動手操作，結果壓力就太高
purge轉鬆時跑水&ACN都沒問題，但轉緊後100%水的壓力12X bar(以前都在97.98)
100% ACN壓力47bar(以前44.45.47)
弄了好幾天，100%水壓力還是沒下降。
1.用梯度洗過(流速 0.2 ml/min；全水跑到全ACN)
2.把管子拆開(沒有進precolumn)
用流速 5 ml/min；100%水、100% MeOH 跑過
3.用A、B、D管線跑兩瓶solvent(MeOH)
<搜尋文章時看到的方法，(只是我多做了B管，因為都裝MeOH)想知道管子有沒有塞住>
A管 抽A瓶solvent(MeOH) 壓力 47 bar
抽B瓶solvent(MeOH) 壓力 50 bar
B管 抽A瓶solvent(MeOH) 壓力 48 bar
抽B瓶solvent(MeOH) 壓力 50 bar
D管 抽A瓶solvent(MeOH) 壓力 49、50 bar
4.洗過solvent水的瓶子，再裝二次水，有震過除氣。
incolumn： 流速1 ml/min，100%水 壓力從98降到78，100%ACN壓力 45。
5. 隔天，流速1 ml/min，100%ACN壓力51，100%水壓力又爆了。
梯度洗，流速0.5 ml/min，每次改20%，每個比例跑半小時。
水(%)100、80、60、...、0、20、...、100。
6. 隔天，流速0.5ml/min，每次改20%，每個比例跑半小時。
只從100%水跑到0%水(因為壓力值跟昨天的差不多，就沒有繼續洗下去)
打一次sample，圖譜差很多。
原來的圖：
https://imgur.com/a/wsdTi
後來的圖(100%水壓力太高)：
https://imgur.com/a/c2iBN
然後我有發現Degasser的指示燈是紅色的
上網找到"Agilent 1100 HPLC化學工作站操作訓練"，裡面寫紅燈表示"error"
又找到"HPLC日常維護故障診斷"(簡體字)
它寫按正常程序關機，然後檢查脫氣機後面是否有一遙控線(與標有remote的接口連接)
若有將之卸下單獨開脫氣機，觀察約8分鐘後，若為紅色則脫氣機問題，若無則沒問題。
因為沒拆過儀器，所以我還不敢做這個，一方面不知道這對不對，一方面怕被我弄壞。
Q1：請問還有什麼方法可以讓壓力下降嗎?或是我可以做哪些事情。
Q2：請問壓力數值差多少算正常範圍? 1、2 bar?
因為大學畢業多年才回學校讀書，又沒碰過HPLC，有非常多不懂的地方，
還希望各位前輩們包涵。謝謝。
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※ 編輯: ankara2 (220.143.187.154), 02/04/2018 13:38:21
1F：→ SSS08957: Maximum 的壓力設定在多少？可能是壓力設太低造成機器sh 02/04 17:18
2F：→ SSS08957: ut down 02/04 17:18
3F：推 chengeric: 4.6*250mm 走100%水,120bar應該不算高,只是大部分C18 02/04 23:26
4F：→ chengeric: column 不能走100%水相,會造成塌陷 02/04 23:28
5F：→ ankara2: pressure limits max:400bar 02/05 09:31
6F：→ ankara2: c大，我們都是purge轉緊後，要記錄100%水跟 02/05 09:33
7F：→ ankara2: 100%ACN的壓力，然後才能打sample進去。 02/05 09:33
8F：→ ankara2: 我知道全水會傷column。每次大概都等4.5分讓壓力值穩定 02/05 09:37
9F：→ ankara2: 再記錄。 02/05 09:37
10F：→ ankara2: s大，我先開儀器，它亮橘燈，但程式打開後，它就變紅燈 02/05 09:44
11F：→ tony15899: 脫氣我建議用抽真空 超音波震心酸的 02/05 12:33
12F：→ tony15899: 大概是溶劑放久了有氣體和Degasser故障 02/05 12:34
13F：→ tony15899: 儀器有保固就找原廠 沒有自己拆看看 02/05 12:35
14F：→ tony15899: 沒保固A家工程師出場費好像1萬起跳 02/05 12:36
15F：→ ankara2: 總結:紅燈可能裡面有東西該換沒換 02/05 18:23
16F：→ ankara2: 逆洗 column。感謝留言的大大們。 02/05 18:25
17F：→ ankara2: 圖不一樣，可能是sample變質了。 02/05 18:27
18F：推 tawin: degaser亮燈, 如果沒有特殊狀況就是裡面的小抽氣馬達壞掉 02/07 22:08
19F：→ ankara2: 我有看到一段空氣進脫氣機，等了很久出來的管子都沒有 02/10 09:30
20F：→ ankara2: 氣泡，所以除氣功能應該是正常的。 02/10 09:31
※ 編輯: ankara2 (220.143.187.182), 02/10/2018 09:32:36
21F：推 rainbowcatch: 為何一定要記錄100%水壓？ 我都是一定比例甲醇+水 02/23 10:14