作者ankara2 (ankara)
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标题[实验] HPLC 压力问题
时间Sun Feb 4 11:52:14 2018
各位前辈大家好~
小妹最近刚学HPLC，遇到问题所以来这发问。
仪器：Agilent 1100
column：C18，非极性逆向(250 mm x 4.6 mm)
第一次自己动手操作，结果压力就太高
purge转松时跑水&ACN都没问题，但转紧後100%水的压力12X bar(以前都在97.98)
100% ACN压力47bar(以前44.45.47)
弄了好几天，100%水压力还是没下降。
1.用梯度洗过(流速 0.2 ml/min；全水跑到全ACN)
2.把管子拆开(没有进precolumn)
用流速 5 ml/min；100%水、100% MeOH 跑过
3.用A、B、D管线跑两瓶solvent(MeOH)
<搜寻文章时看到的方法，(只是我多做了B管，因为都装MeOH)想知道管子有没有塞住>
A管 抽A瓶solvent(MeOH) 压力 47 bar
抽B瓶solvent(MeOH) 压力 50 bar
B管 抽A瓶solvent(MeOH) 压力 48 bar
抽B瓶solvent(MeOH) 压力 50 bar
D管 抽A瓶solvent(MeOH) 压力 49、50 bar
4.洗过solvent水的瓶子，再装二次水，有震过除气。
incolumn： 流速1 ml/min，100%水 压力从98降到78，100%ACN压力 45。
5. 隔天，流速1 ml/min，100%ACN压力51，100%水压力又爆了。
梯度洗，流速0.5 ml/min，每次改20%，每个比例跑半小时。
水(%)100、80、60、...、0、20、...、100。
6. 隔天，流速0.5ml/min，每次改20%，每个比例跑半小时。
只从100%水跑到0%水(因为压力值跟昨天的差不多，就没有继续洗下去)
打一次sample，图谱差很多。
原来的图：
https://imgur.com/a/wsdTi
後来的图(100%水压力太高)：
https://imgur.com/a/c2iBN
然後我有发现Degasser的指示灯是红色的
上网找到"Agilent 1100 HPLC化学工作站操作训练"，里面写红灯表示"error"
又找到"HPLC日常维护故障诊断"(简体字)
它写按正常程序关机，然後检查脱气机後面是否有一遥控线(与标有remote的接口连接)
若有将之卸下单独开脱气机，观察约8分钟後，若为红色则脱气机问题，若无则没问题。
因为没拆过仪器，所以我还不敢做这个，一方面不知道这对不对，一方面怕被我弄坏。
Q1：请问还有什麽方法可以让压力下降吗?或是我可以做哪些事情。
Q2：请问压力数值差多少算正常范围? 1、2 bar?
因为大学毕业多年才回学校读书，又没碰过HPLC，有非常多不懂的地方，
还希望各位前辈们包涵。谢谢。
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※ 编辑: ankara2 (220.143.187.154), 02/04/2018 13:38:21
1F：→ SSS08957: Maximum 的压力设定在多少？可能是压力设太低造成机器sh 02/04 17:18
2F：→ SSS08957: ut down 02/04 17:18
3F：推 chengeric: 4.6*250mm 走100%水,120bar应该不算高,只是大部分C18 02/04 23:26
4F：→ chengeric: column 不能走100%水相,会造成塌陷 02/04 23:28
5F：→ ankara2: pressure limits max:400bar 02/05 09:31
6F：→ ankara2: c大，我们都是purge转紧後，要记录100%水跟 02/05 09:33
7F：→ ankara2: 100%ACN的压力，然後才能打sample进去。 02/05 09:33
8F：→ ankara2: 我知道全水会伤column。每次大概都等4.5分让压力值稳定 02/05 09:37
9F：→ ankara2: 再记录。 02/05 09:37
10F：→ ankara2: s大，我先开仪器，它亮橘灯，但程式打开後，它就变红灯 02/05 09:44
11F：→ tony15899: 脱气我建议用抽真空 超音波震心酸的 02/05 12:33
12F：→ tony15899: 大概是溶剂放久了有气体和Degasser故障 02/05 12:34
13F：→ tony15899: 仪器有保固就找原厂 没有自己拆看看 02/05 12:35
14F：→ tony15899: 没保固A家工程师出场费好像1万起跳 02/05 12:36
15F：→ ankara2: 总结:红灯可能里面有东西该换没换 02/05 18:23
16F：→ ankara2: 逆洗 column。感谢留言的大大们。 02/05 18:25
17F：→ ankara2: 图不一样，可能是sample变质了。 02/05 18:27
18F：推 tawin: degaser亮灯, 如果没有特殊状况就是里面的小抽气马达坏掉 02/07 22:08
19F：→ ankara2: 我有看到一段空气进脱气机，等了很久出来的管子都没有 02/10 09:30
20F：→ ankara2: 气泡，所以除气功能应该是正常的。 02/10 09:31
※ 编辑: ankara2 (220.143.187.182), 02/10/2018 09:32:36
21F：推 rainbowcatch: 为何一定要记录100%水压？ 我都是一定比例甲醇+水 02/23 10:14