使用TLC以及流column要有幾個觀念 1.點片不要點太大點，有時2個點靠很近你會誤認是一個點 2.在點沒有很大，TLC上顯示卻又拖尾時 要考慮一下是不是溶解度不夠好 有時化合物帶有一些官能基像COOH等會拖尾是正常的 遇到拖尾嚴重的情況可以滴一滴醋酸在溶劑系統裡試試 3.選擇溶劑系統，溶解度為優先 溶解度不夠好化合物會在流洗過程慢慢析出 會很難收到乾淨的點 接著才是控制Rf值距離 我自己習慣在0.3~0.5左右 拉低通常可以流比較乾淨，但是時間就會拉很長 如果點沒有靠很近我就會拉到0.5甚至更高都有可能 但建議剛開始不用想求快，練熟了再說 少數情況 點片雖然拉的動，但是用該溶劑比例卻拉不出來 有時是化合物需要到一定的極性才會流出來的緣故 可以加大溶劑極性看看 然後點很多個，需要每個都分出來看時 可以在流column過程中調整溶劑比例試試 通常由低極性開始，將前面的點先分開帶出來 再加大極性帶出後面的點 溶劑系統其實不單只有Ethyl acetate(EA)-Hexane(HEX) dichloromethane(DCM)-Methanol(MeOH)也行 不過當MeOH比例到10%以上時溶出來的silica就會不少 真的要硬流就是流完再過濾一次吧.. 低極性的情況，DCM-Ether、DCM-HEX、Acetone-HEX等 我也有使用過 當溶劑系統改變時，點的先後順序也會變動 一定要多點片確認一下 經驗來說，少苯環的化合物可以用ether 多苯環的化合物試試DCM 剛開始不夠熟練，可以多看paper 找跟自己做的相近的化合物，看看別人的溶劑系統 很多還會附上溶劑比例跟Rf值 做久了你就會有概念了 4.TLC不只一種固定相 一般最常用Silica gel glass plate(Normal phase) 當溶解度夠好，但是點又拉不起來時，就是化合物極性太高 可以換成使用C-18的RP-18 glass plate(Reverse phase) 不過價格貴很多 如果要用C18流column，有的實驗室會要你回收C18 gel 接著是少數的情況，化合物跟Silica親合性很好 或是卡在column上時，可以考慮用Aluminum Oxide 這算是較中性的固定相 不過因為親和性較低，容易衝太快 多加嘗試再使用 有些更專門的實驗室還會訂製特殊的gel 像做生物蛋白的，這又是另一回事了 5.Packing column前，確定gel跟溶劑系統充分攪拌均勻 確實震動column讓它緊實 當你Loading的化合物量大、極性高 dry-loading會是比較好的方式 方法是將化合物溶解，加入適量的silica gel 用減壓濃縮將solvent去除，最好再上真空盡量抽乾 (記得在緩衝瓶塞棉花，不然gel抽上去會損害pump) 殘餘的高極性溶劑都可能會影響流column packing時盡量讓它均勻分布在gel頂端 要小心添加solvent時不要讓gel飄起 當點靠很近的時候，每根tube不要收多 有些人想少洗tube每管都收很多，收光譜才發現雜到其它點 還有TLC看不到不代表NMR看不到 必要時每一管就獨立測NMR圖 目前只想到這些，有想到再補 ※ 引述《ajyy002 (Amine)》之銘言： : 小的我不久前進到一間實驗室做專題>< : 裡面最常用的純化方法就是流column， : 想當然爾，小嘍嘍就被叫去流column啊， : 以前頭頭都會告訴我跑液比例， : 所以一切都很順利 : 直到不久前頭頭試了些新反應，要我自己用TLC找極性 : 而在TLC片上常常分不太開......但是有分開，約0.3cm左右吧 : 但是在流column收產物的時候，常常會兩個點一起出來...... : 我自己覺得可能是管柱長度不夠長， : 而我其實也不太會調整極性，常常TLC片上不是跑不上來就是分不開 : 我們實驗室最常用的跑液是hexane、EA、DCM， : 我主要也是只會用到這三種， : 而關於跑液調配比例和長度我的頭頭都告訴我他是靠直覺和經驗QAQ!? : 所以請問有哪位前輩有相關經驗可以分享嗎？我真的想要學得快一點...... -- 人類追求公正的理性、同時也順從慾望的瘋狂 傷害則沉默的站在兩者之間，等待著.. --

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