作者young1022 (183)
看板Chemistry
標題Fw: [請問] 科學研究-葡萄糖檢測
時間Mon Apr 14 23:50:22 2014
※ [本文轉錄自 ask 看板 #1JI_zj5G ]
作者: young1022 (183) 看板: ask
標題: [請問] 科學研究-葡萄糖檢測
時間: Mon Apr 14 23:31:55 2014
在下是個碩士生
最近在搞葡萄糖檢測
主要是利用葡萄糖氧化酶分解Beta-D-glucose所產生的H2O2
再與具有peroxidase activity的奈米材料與指示劑(TMB)反應產生顏色變化
目前遇到的問題是
我所購買的葡萄糖氧化酶(50kU)不會與beta-D-glucose反應，產生H2O2
實驗方法大致如下:
1.配置葡萄糖氧化酶溶液(1mg/mL)=取定量的酶溶於0.1M醋酸緩衝液中，等待混和均勻
直接放入-20度冰箱冷凍，要用時再拿出，於冰浴狀態下退凍。
2.配置葡萄糖溶液(0.5M)=取定量的beta-D-glucose溶於DI water。
反應架設:
將0.1ml酶溶液、0.1ml葡萄糖溶液及0.5ml磷酸鈉緩衝液(pH 7)，添加於2ml大的eppendorf
再隔水加熱(37度)
可是在後續的檢測發現(添加奈米材料與指示劑)
上述的反應中，似乎沒有產生我要的產物(H2O2)
不知PTT版上的各位大大
有誰有做過類似的實驗
有沒有相關的經驗可以指導
因為實在找不到問題出在哪啊!!!!!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.115.63.221
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1F：推 hvariables:Chemistry板 04/14 23:34
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
※ 轉錄者: young1022 (140.115.63.221), 04/14/2014 23:50:22
2F：→ wanderchang:確定反應條件跟廠商建議沒有差太多?會不會是雙氧水分 04/15 08:52
3F：→ wanderchang:解？溫度有點高 04/15 08:52
4F：→ wanderchang:沒有作過，只是提供猜測 04/15 08:53
5F：推 comt:先確認你的酵素活性 會不會是死掉了 04/15 09:30
6F：→ comt:酵素反應溫度在30-40度是很常見的溫度 應該沒問題 04/15 09:31
8F：推 comt:要 04/17 16:46
9F：→ reckson1017:酵素 來源很重要 不同廠商效果大不同 04/17 20:32
10F：→ young1022:請問cofactor是什麼東西呢 04/21 22:03
11F：→ young1022:酵素是跟sigma所購買的 應該不會出問題 04/21 22:14