作者young1022 (183)
看板Chemistry
标题Fw: [请问] 科学研究-葡萄糖检测
时间Mon Apr 14 23:50:22 2014
※ [本文转录自 ask 看板 #1JI_zj5G ]
作者: young1022 (183) 看板: ask
标题: [请问] 科学研究-葡萄糖检测
时间: Mon Apr 14 23:31:55 2014
在下是个硕士生
最近在搞葡萄糖检测
主要是利用葡萄糖氧化酶分解Beta-D-glucose所产生的H2O2
再与具有peroxidase activity的奈米材料与指示剂(TMB)反应产生颜色变化
目前遇到的问题是
我所购买的葡萄糖氧化酶(50kU)不会与beta-D-glucose反应，产生H2O2
实验方法大致如下:
1.配置葡萄糖氧化酶溶液(1mg/mL)=取定量的酶溶於0.1M醋酸缓冲液中，等待混和均匀
直接放入-20度冰箱冷冻，要用时再拿出，於冰浴状态下退冻。
2.配置葡萄糖溶液(0.5M)=取定量的beta-D-glucose溶於DI water。
反应架设:
将0.1ml酶溶液、0.1ml葡萄糖溶液及0.5ml磷酸钠缓冲液(pH 7)，添加於2ml大的eppendorf
再隔水加热(37度)
可是在後续的检测发现(添加奈米材料与指示剂)
上述的反应中，似乎没有产生我要的产物(H2O2)
不知PTT版上的各位大大
有谁有做过类似的实验
有没有相关的经验可以指导
因为实在找不到问题出在哪啊!!!!!!!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.115.63.221
※ 文章网址: http://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/ask/M.1397489517.A.150.html
1F：推 hvariables:Chemistry板 04/14 23:34
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
※ 转录者: young1022 (140.115.63.221), 04/14/2014 23:50:22
2F：→ wanderchang:确定反应条件跟厂商建议没有差太多?会不会是双氧水分 04/15 08:52
3F：→ wanderchang:解？温度有点高 04/15 08:52
4F：→ wanderchang:没有作过，只是提供猜测 04/15 08:53
5F：推 comt:先确认你的酵素活性 会不会是死掉了 04/15 09:30
6F：→ comt:酵素反应温度在30-40度是很常见的温度 应该没问题 04/15 09:31
8F：推 comt:要 04/17 16:46
9F：→ reckson1017:酵素 来源很重要 不同厂商效果大不同 04/17 20:32
10F：→ young1022:请问cofactor是什麽东西呢 04/21 22:03
11F：→ young1022:酵素是跟sigma所购买的 应该不会出问题 04/21 22:14