作者hadessage (...)
看板Chemistry
標題[實驗] HPLC VS TLC HPLC無法分離
時間Wed Aug 7 08:56:31 2013
有關HPLC實驗問題
在做一有機化合物分離
肉眼看顏色很明顯有兩種不同
sample為中性 溶於THF 微溶MeOH
TLC Plate用的是Silica Gel
以THF:MeOH=1:4去跑則分成兩點
但是用HPLC去跑C18 column THF:MeOH=1:4
不管流速快慢0.1~1ml/min
還是改變溶劑比例
在HPLC都只有一根PEAK 無法分離
懇請高手幫助
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雖然我們不再像以往以前一樣有力
以非往昔可以驚天動地
但我們能仍然是自己
英雄的情懷與雄心
隨著時間與命運而薄弱
但意志仍舊堅定
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◆ From: 61.219.129.193
※ 編輯: hadessage 來自: 61.219.129.193 (08/07 10:25)
1F：推 TW185930:你TLC 是 coating C18的嗎? 08/07 14:12
2F：→ TW185930:跑HPLC 跑多久? 08/07 14:13
3F：→ hadessage:TLC Plate用的是Silica Gel 08/07 16:28
4F：→ hadessage:HPLC跑到60min 都是一根 手邊也沒有c18的TLC片 08/07 16:29
5F：→ hadessage:這樣有辦法判別嗎? 08/07 16:29
6F：→ tony15899:C18很早就沖出來的話可能強度太強 逐步調低看看 08/07 17:28
7F：→ tony15899:畢竟你用的是全有機相 08/07 17:30
THF:MeOH = 20:80 流速0.5ml/min 約在10min跑出
THF:MeOH = 5:95 流速0.3ml/min 約在40min跑出
可是還是通通只有一根 完全無法分離另一個點
※ 編輯: hadessage 來自: 114.32.189.177 (08/07 18:11)
8F：→ chrisyuu:UV波長? 08/07 18:55
9F：→ hadessage:254nm 08/07 19:07
10F：→ hadessage:210~800 怎麼掃都只有一根 08/07 19:07
11F：→ chrisyuu:跑完片後各別刮下來回溶再打HPLC呢? 08/07 19:52
12F：推 cuddi:可以跑梯度看看.. 08/07 22:28
感謝chrisyuu大 和 cuddi大
明天來試看看這些招術
※ 編輯: hadessage 來自: 114.32.189.177 (08/07 23:09)
13F：→ sisay:還是改用Si60 column分比較快 08/08 20:56
14F：→ sisay:但是tlc分的開 直接流支column應該也分的開吧~ 08/08 20:57
15F：推 TW185930:他用silica gel TLC分，但是C18 column跑，這樣條件分， 08/09 13:24
16F：→ TW185930:能不適合他的C18 條件 08/09 13:24
後來還是是不出來
最後跑COLUMN分離出另一點 在單做HPLC打點看看
結果是強度太低根本看不清楚的點
可是在TLC上明明很清楚啊
※ 編輯: hadessage 來自: 61.219.129.193 (08/09 15:16)
17F：推 TW185930:因為你用SILICA TLC 找條件 不是C18 -silica ，所以會有 08/09 21:51
18F：→ TW185930:些差異 08/09 21:52
19F：推 HPLC:那就別再用THF跟MeOH跑C18 因為你在怎麼分 只有出來時間不同 08/11 16:22
20F：→ HPLC:不會因為比例不同 而可以分離出來 再找新條件吧 08/11 16:22
21F：→ HPLC:而且 HPLC 級的 THF 也不便宜吧XD 08/11 16:23
22F：→ HPLC:C18 有C18的條件 silica 有 silica的條件 正常都不太能互用 08/11 16:26
23F：→ HPLC:我用silica gel有純化出一個結晶 但 點片 長短波 沒吸收 08/11 16:30
24F：→ HPLC:HPLC用了很多條件 也分不出來 但 燒片 卻出來了 很妙吧 08/11 16:30
25F：→ HPLC:而且HPLC 沒訊號喔 ^.< 08/11 16:31
26F：推 simonmiho:可以用極性低些的mobile phase 試試..有可能是compound 08/11 19:58
27F：→ simonmiho:卡在column內沒出來.如果肉眼都看的到..detector應該看 08/11 19:59
28F：推 simonmiho:的到.不然還有種可能..曾經有人應該HPLC的管子是金屬材 08/11 20:03
29F：→ simonmiho:質..而吸附在管內面...不過這個機率應該很低很低.... 08/11 20:05
30F：→ hadessage:感謝大家提供方法 08/12 22:11