作者hadessage (...)
看板Chemistry
标题[实验] HPLC VS TLC HPLC无法分离
时间Wed Aug 7 08:56:31 2013
有关HPLC实验问题
在做一有机化合物分离
肉眼看颜色很明显有两种不同
sample为中性 溶於THF 微溶MeOH
TLC Plate用的是Silica Gel
以THF:MeOH=1:4去跑则分成两点
但是用HPLC去跑C18 column THF:MeOH=1:4
不管流速快慢0.1~1ml/min
还是改变溶剂比例
在HPLC都只有一根PEAK 无法分离
恳请高手帮助
--
虽然我们不再像以往以前一样有力
以非往昔可以惊天动地
但我们能仍然是自己
英雄的情怀与雄心
随着时间与命运而薄弱
但意志仍旧坚定
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.219.129.193
※ 编辑: hadessage 来自: 61.219.129.193 (08/07 10:25)
1F：推 TW185930:你TLC 是 coating C18的吗? 08/07 14:12
2F：→ TW185930:跑HPLC 跑多久? 08/07 14:13
3F：→ hadessage:TLC Plate用的是Silica Gel 08/07 16:28
4F：→ hadessage:HPLC跑到60min 都是一根 手边也没有c18的TLC片 08/07 16:29
5F：→ hadessage:这样有办法判别吗? 08/07 16:29
6F：→ tony15899:C18很早就冲出来的话可能强度太强 逐步调低看看 08/07 17:28
7F：→ tony15899:毕竟你用的是全有机相 08/07 17:30
THF:MeOH = 20:80 流速0.5ml/min 约在10min跑出
THF:MeOH = 5:95 流速0.3ml/min 约在40min跑出
可是还是通通只有一根 完全无法分离另一个点
※ 编辑: hadessage 来自: 114.32.189.177 (08/07 18:11)
8F：→ chrisyuu:UV波长? 08/07 18:55
9F：→ hadessage:254nm 08/07 19:07
10F：→ hadessage:210~800 怎麽扫都只有一根 08/07 19:07
11F：→ chrisyuu:跑完片後各别刮下来回溶再打HPLC呢? 08/07 19:52
12F：推 cuddi:可以跑梯度看看.. 08/07 22:28
感谢chrisyuu大 和 cuddi大
明天来试看看这些招术
※ 编辑: hadessage 来自: 114.32.189.177 (08/07 23:09)
13F：→ sisay:还是改用Si60 column分比较快 08/08 20:56
14F：→ sisay:但是tlc分的开 直接流支column应该也分的开吧~ 08/08 20:57
15F：推 TW185930:他用silica gel TLC分，但是C18 column跑，这样条件分， 08/09 13:24
16F：→ TW185930:能不适合他的C18 条件 08/09 13:24
後来还是是不出来
最後跑COLUMN分离出另一点 在单做HPLC打点看看
结果是强度太低根本看不清楚的点
可是在TLC上明明很清楚啊
※ 编辑: hadessage 来自: 61.219.129.193 (08/09 15:16)
17F：推 TW185930:因为你用SILICA TLC 找条件 不是C18 -silica ，所以会有 08/09 21:51
18F：→ TW185930:些差异 08/09 21:52
19F：推 HPLC:那就别再用THF跟MeOH跑C18 因为你在怎麽分 只有出来时间不同 08/11 16:22
20F：→ HPLC:不会因为比例不同 而可以分离出来 再找新条件吧 08/11 16:22
21F：→ HPLC:而且 HPLC 级的 THF 也不便宜吧XD 08/11 16:23
22F：→ HPLC:C18 有C18的条件 silica 有 silica的条件 正常都不太能互用 08/11 16:26
23F：→ HPLC:我用silica gel有纯化出一个结晶 但 点片 长短波 没吸收 08/11 16:30
24F：→ HPLC:HPLC用了很多条件 也分不出来 但 烧片 却出来了 很妙吧 08/11 16:30
25F：→ HPLC:而且HPLC 没讯号喔 ^.< 08/11 16:31
26F：推 simonmiho:可以用极性低些的mobile phase 试试..有可能是compound 08/11 19:58
27F：→ simonmiho:卡在column内没出来.如果肉眼都看的到..detector应该看 08/11 19:59
28F：推 simonmiho:的到.不然还有种可能..曾经有人应该HPLC的管子是金属材 08/11 20:03
29F：→ simonmiho:质..而吸附在管内面...不过这个机率应该很低很低.... 08/11 20:05
30F：→ hadessage:感谢大家提供方法 08/12 22:11