※ 引述《kentai (為什麼沒有愛 在我們之間)》之銘言： : 我還是沒做出來>< 可恨阿 : 不論如何都得不到一個點的管>< : 我把我的步驟寫一下 看大家看一下有什麼錯誤 很多的部分前面的版友都講過了.. 我也是建議你請人帶你做一次吧... 看起來閣下應該沒啥流column的經驗 : 東西有三個點 剪一片約六公分的TLC 用純EA去跑 一般少用單一溶劑去流管柱 : 距離上端0.5cm有一個點 再間隔1cm有第二點(產物) 再間隔1cm有第三點 : 感覺是分的很開 Rf值太高了.. 這樣你EA一灌下去,Rf值0.5跟0.8的點老實說沒啥分離到... 請將主要的點調在Rf＝0.3左右,也就是說請換沖提液的極性.. 用hexane/EA這個系統是比較普遍的選擇.. : 準備Packing Gel 用的是silica gel 使用的column是250ml 直徑大概5cm吧 : 用Hexane packing ,Gel大概有20cm高，加壓1次10分鐘 做5次 如果你真的覺得那麼難分,可以用濕填的,效果會比較好（不過你的應該不至於難分） : load大概有3cm ，等到跑到乳化面的時候，慢慢加入EA 開始跑 loading太高,一般請在1公分左右.. 請換大一點的管柱不然就分兩次流吧 你極性就已經那麼高了,還loading那麼厚一層,這樣當然很容易mix在一起 : 用12x75mm的試管去接 20管左右有第1點 23~26有兩點 27~點消失約80管 有三點 : 所以我大部分的產物都混在三點裡面 好痛苦阿>< : 另外 Gel常常跑了卻產生龜裂的現象 明明沒乾 不知道為什麼@@ 因為沖提液極性變太快了 基本上你packing時就可以用hexane/EA（Rf＝0.3左右）的系統去packing了 然後流的時候就不用換沖提液了,自然也就不會龜裂了 如果你真的覺得後面出來的點太慢了,可以慢慢提高沖提液極性將後面的衝出來 當然前提是你前面的點已經出來了 如果是大量的而且又如你所說點與點之間分隔得很遠的話 那其實用一下簡單的flash column也可以快速得到不錯的分離效果 : 不知道大家有什麼意見>< Thx! : ※ 引述《WEINUO (擁抱現在)》之銘言： : : 30公分算可怕嗎@@? : : 我有看過PACKING將近50公分的....而且直徑4公分 : : 實驗室還有一支...直徑大約有十公分的..COLUMN~至於總長度也有50公分以上 : : ..在加壓下..時間大約30分鐘~應該不難吧.. : : 我說的是~~不算一開始的packing和loading..也不算濃縮的時間 : : 熟練的人30分鐘就可以收完了.... : : 主要的關鍵在solvent..如果是要收二個點以上..中途要換solvent 的比例 : : 那自然就很難30min收完 : : 本來實驗室的人也不信...但看過資深的流過直徑2.5cm的column : : 大約30分鐘...... : : 尤其是直徑愈小的column~完成時間愈短..~ : : 多流就會愈快.... : : 只是在工廠...做大量的都是做結晶....不太流column.. --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.216.41.17