作者knight791211 (三途河的擺渡人)
看板Biotech
標題[求救] 原核表現蛋白誘導 溶解度
時間Mon Mar 26 17:14:10 2018
大家好 小弟之前參考了很多製造可溶蛋白的方法
比如用低濃度IPTG(0.1uM) 搖慢一點(50rpm) 低溫隔夜 (16度)
結果用french press 處理後 跑SDS PAGE
上清液產物一樣不多
破完菌的pellet 用8M urea 暴力解也溶不掉
只有在加2-Me跟buffer 煮沸才有辦法讓他溶解
電泳結果最多的就是那塊無解pellet
請問這是我破菌不完全還是說他注定就不可溶?
(正在做的是fusion protein 性質很難捉摸)
大概是這樣 感謝各位
-----
Sent from JPTT on my LGE LG-H815.
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.242.1
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1522055656.A.8BA.html
1F：→ Ianthegood: 顯微鏡看看你的汁有沒有破乾淨啊 然後你的protein跟fu 03/26 19:27
2F：→ Ianthegood: sion分別是什麼？ 03/26 19:27
3F：→ Ianthegood: 真的是0.1uM沒打錯齁 03/26 19:27
4F：推 joseph103331: Urea溶不掉是金剛護體嗎XD 搖久一點呢? 03/26 20:13
5F：推 joseph103331: 另外, 改用GST fusion通常可以改善溶解度, 可以試試 03/26 20:15
6F：→ knight791211: 打錯了 是mM 抱歉 03/27 12:43
7F：→ knight791211: 蛋白是cytokine fusion的東西教授說不可透露 03/27 12:43
8F：→ knight791211: 基本上我們實驗室做的蛋白破完用urea溶個一小時都還 03/27 12:45
9F：→ knight791211: 是會有一堆渣渣在漂… 唯一的辦法就是french press 03/27 12:45
10F：→ knight791211: 再打爆一次 囧 03/27 12:45
11F：推 joseph103331: 還有渣渣是正常的, 主要是Urea上清是否有蛋白質 03/27 17:03
12F：→ Ianthegood: 我induction有時候會用到0.05甚至0.01mM 可以把一些 03/27 17:06
13F：→ Ianthegood: 太好表現的水溶性小蛋白推回soluble 03/27 17:06
14F：推 vivitune: 考慮換表現菌株，例如star系列1-5，會表現chaperones ， 04/06 20:38
15F：→ vivitune: 幫助蛋白質溶解。 04/06 20:38
16F：推 vivitune: 有些蛋白質真的無法用細菌表現，可能要用到其他系統， 04/06 20:39
17F：→ vivitune: 比如昆蟲細胞。 04/06 20:39