作者stephilow ()
看板Biotech
標題[求救] 基轉後農桿菌無法根除
時間Wed Jan 31 17:31:29 2018
想請問一下，
我做植物的基因轉殖，
是用農桿菌感染的轉殖方式。
植物材料是桉樹跟菸草無菌苗的葉片。
感染後兩天葉片周圍會長出細菌，
我加入cefataxin和carbcillin清洗後，
發覺菌量會暴增，之後怎麼洗也很清除乾菌。
最後是菌量過多掩蓋葉片，然後葉片就爛掉死了...
請問有甚麼方法可以解決?(做了一年都沒成果)
如果是菌種汙染，有甚麼方法可以可以解決?
謝謝
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1F：推 Ianthegood: 組培嗎？ Ti plasmid的resistance gene是什麼？ 01/31 18:28
2F：→ huuban: 可能感染結束之後沒有洗乾淨吧? 02/01 00:24
3F：→ huuban: 有菌冒出來就很難救了啊... 02/01 00:25
4F：→ stephilow: 覺得農桿菌超難洗... 也用超音波震盪，但植物組也死了 02/01 09:42
5F：→ huuban: 唔..那可以請問您都是怎麼洗的嗎? 02/02 00:20
6F：→ huuban: 或者也可能是感染時間太長，菌長上來了 02/02 00:28
7F：→ huuban: 菸草的話..我記得感染3-5分鐘，無菌水洗三次，抗生素一次 02/02 00:29
8F：→ huuban: 無抗生素的培養基培養48小時，然後換到有抗生素的培養基 02/02 00:30
9F：→ huuban: 參考中研院轉殖植物核心實驗室>實驗方法>轉殖實驗 02/02 00:35
10F：→ stephilow: 感謝解答! 中研院的資料外人可以查閱? 02/03 00:50
11F：→ stephilow: 另外，菸草葉片很薄，會先pre-culture嗎? 02/03 00:52
12F：推 huuban: 可以唷，中研院的這個資料是完全公開的~ 02/04 23:16
13F：→ huuban: 請問pre-culture是甚麼 > <? 02/04 23:17
14F：→ huuban: 我習慣用50 ml離心管洗，無菌水30 ml，用力搖100下 02/04 23:18