作者sunnyandsund (sunny)
看板Biotech
標題[求救] 關於western blot native gel 的問題
時間Tue Dec 26 17:23:27 2017
最近要跑native gel
因為以前都是跑denature gel
沒有跑過這種的
想問板上有人知道native gel的配方嗎?
我知道是沒加SDS和sample 不用煮
那我想問在作法上還有什麼不一樣嗎?
因為我在網路上查就只是少了SDS
可是怎麼上膠和下膠的tris的PH值一樣
難道native沒分上下嗎?
所以想請板上的好心人是否有配方?
以及配方的來源
感激不盡
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.117.114.207
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1514280210.A.DA1.html
1F：→ Ianthegood: native根據你想分的dimension也有很多種喔 最常見的大 12/26 20:15
2F：→ Ianthegood: 概是blue native page 12/26 20:15
3F：→ sunnyandsund: 你好 我是在網路上這個地方看到這樣的配方,那這是P 12/26 21:03
4F：→ sunnyandsund: 他的配方就是跟SDS一樣 只是少了SDS,但是她的上下膠 12/26 21:07
5F：→ sunnyandsund: 但是她的上下膠的tris的PH值都一樣 想問這是為什麼 12/26 21:08
6F：→ sunnyandsund: 還有這樣的話 這是屬於你說的那種BN page嗎? 12/26 21:09
8F：推 tynse71864: 點進去沒有東西耶 12/27 09:01
9F：→ tynse71864: 另外 marker要重買 12/27 09:01
10F：→ sunnyandsund: 呃 因為留言的字數有限 我不知道要怎麼貼完整的網 12/27 10:12
11F：→ sunnyandsund: 那上下膠的PH值會不一樣嗎? 12/27 10:13
12F：→ a90648: native就同I大說的有很多種，不過我覺得你還是要弄清楚 12/28 10:38
13F：→ a90648: 為什麼SDS PAGE的上下膠PH不一樣的原因是甚麼 12/28 10:39
15F：→ silverberry: 而且要做 western blot 的話，還要考慮到抗體能不能 12/28 16:14
16F：→ silverberry: 辨認"native"下的蛋白質。如同樓上大師們的分享， 12/28 16:14
17F：→ silverberry: 可能要先確定到底想要研究什麼問題。 12/28 16:15
18F：→ sunnyandsund: 謝謝樓上的各位 12/28 23:03
20F：推 t0953337796: 我之前做過 native page有分上下膠，但是Tris PH值 01/27 02:13
21F：→ t0953337796: 都是8.8 但是其他溶液的比例不一樣。SDS PAGE上面是 01/27 02:13
22F：→ t0953337796: 用6.8是因為讓glycine帶正電，與tris帶的電性不同， 01/27 02:13
23F：→ t0953337796: 所以可以擠壓sample，讓他從同一個起跑點出發，但是 01/27 02:13
24F：→ t0953337796: native page是為了保有蛋白原來的結構，不能受到擠 01/27 02:13
25F：→ t0953337796: 壓，所以結論是有分上下膠，但是Tris皆為PH8.8 01/27 02:13