作者small3chiu (山邱)
看板Biotech
標題[求救] 細胞培養
時間Sat Dec 23 15:21:16 2017
手機排版，請見諒
大家好，小弟最近剛接觸細胞培養，有些問題想請教一下：
1.細胞種的不均勻:
我是用10cm dish去養insulinoma cell line，我習慣先把medium 先加到dish ，再把
細胞一滴一滴分散加入medium後再8字個10圈（細胞在種之前都會pipeting個10次）。上
述都是已經問過周遭的朋友改善的方法，不過還是一樣一邊超滿一邊少到長不起來。不知
道哪裡需要再改善?
2.之前在配medium時，沒有注意到血清仍有懸浮物就直接加進medium，懸浮物會影響細胞
的生長嗎?
3.解凍細胞時，1.直接把凍管的細胞液加進medium 2.離掉DMSO加新鮮medium。這兩個方
法去種細胞對細胞生長那個會比較好?
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1F：推 roy047: 1.先確認培養箱是不是水平的QQ 2.應該沒差 3.離掉DMSO 12/23 15:29
2F：推 joseph103331: 1. 不推薦8字，尤其dish是圓的容易有漩渦，比較推 12/23 15:40
3F：→ joseph103331: 薦10字，另培養箱水平的確有關，沒有水平儀可以用 12/23 15:40
4F：→ joseph103331: 手機包在夾鏈袋裡面用app去測。 12/23 15:40
5F：→ joseph103331: 2. 有疑慮就過濾，雖然經驗上沒有差異。 12/23 15:40
6F：→ joseph103331: 3. 一般細胞是先以培養基稀釋，離心後去除DMSO，但 12/23 15:40
7F：→ joseph103331: 一些較脆弱的貼壁細胞會受到離心的影響，可以先用 12/23 15:40
8F：→ joseph103331: 培養基稀釋後直接培養，細胞貼附後再小心置換培養 12/23 15:40
9F：→ joseph103331: 基。 12/23 15:40
10F：→ blence: 請問這株insulinoma是人類的嗎？ 12/23 15:43
11F：推 greatime: 一般細胞DMSO 最後<0.5%不會影響生長 12/23 20:39
12F：推 tynse71864: 第三點兩種都試過 偏好離掉 DMSO 12/25 00:00
13F：推 marvelous13: 1.也可能是dish的問題。2.不需過濾，離心即可 12/25 00:21
14F：推 Campanella: 我養在T75，先取所需的media加到flask，用media rinse 01/13 01:59
15F：→ Campanella: 一下flask，之後取出放入15ml tube，再取所需細胞加 01/13 01:59
16F：→ Campanella: 入15ml tube混均勻，再一起加入T75中。 01/13 01:59
17F：推 Campanella: 加細胞到flask時flask平放微微傾斜，加完之後靜置hood 01/13 02:05
18F：→ Campanella: 一段時間，約5-10 分讓細胞下沉plate down，移動到inc 01/13 02:05
19F：→ Campanella: ubator的時候細胞比較不會亂飄到別的位置 01/13 02:05