作者steve42125 (DrunkenBlue)
看板Biotech
標題[求救] H1299 養Sphere都會貼盤
時間Sun Oct 29 00:39:44 2017
各位好
今年剛升碩一進實驗室
最近老闆要我養H1299的Sphere去做後續的實驗
因為以前也有學長姊用過這個細胞株養sphere所以我也依照他們的protocol操作
但是試了三四次總是貼盤
以下是我的操作步驟 希望大家能提供我一些可能我沒注意到的事情或著可以改進的線索
1.Parental cell以Trypsin打下後以Complete culture medium中和離心
2.將medium去乾淨後以1 ml PBS resuspend後再離心
3.去除PBS後以Serum free sphere medium resuspend後以1*10^4/2ml/well種進6 well
4.之後每隔4天補sphere medium 500ul/well
但是通常在種下去的4天後 也就是準備第一次補medium時用顯微鏡先確認狀況
就發現有滿多細胞已經貼盤了 並且漂著的細胞數量變得滿少的
有試過改變一些步驟
包括：多用PBS wash一次、
不以PBS wash，而是以sphere medium wash一次,
離心去除再加sphere medium
希望有人能夠分享一點成功的經驗和撇步
一直失敗很苦惱.....
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1F：→ xxtomnyxx: 你用的是 for cell culture 的 6-well 嗎？換成 petri 10/29 00:47
2F：→ xxtomnyxx: 試試看？ 10/29 00:47
不好意思 petri 是指那種6cm一般養細胞的plate嗎?
因為我們實驗室養sphere都是用6 well 之後收了做qPCR或Western
我們實驗室的6 well 好像就只有兩種 一種是low attachment 一種是一般的
我會再去看看...
3F：推 moon0126: 換成non-treated well dish試試看 10/29 01:01
我們實驗室的6 well好像是non-treated的了....
4F：推 joseph103331: 請教一下養sphere是什麼意思? 純粹好奇> < 10/29 01:37
cancer cell如果有CSC的特性的話 可以從一顆細胞分裂出其他細胞聚集成一個微球體的型態
用這種培養的方式來篩選出CSC(不知道有沒有歪掉 請幫忙補充XD)
5F：推 qiet: plate有用對? 要用low-attachment plate這一類的吧 10/29 01:45
plate應該是沒有用錯... 我們實驗室確實是有low-attachment的plate 但是是給其他種細胞用的
因為之前學長姐也是用一般的6 well就養的出來了所以我也沒用那個....
※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:29:55
※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 16:41:16
6F：→ blence: 如果以前的學長姊成功養過,直接去尋求解決比較有效 10/29 16:40
7F：→ blence: 不過通常會發問可能是學長姊不在lab,protocol就不能盡信了 10/29 16:40
8F：→ blence: 上面說的就是看著low_attached不用這部分 10/29 16:43
了解.... 或許我可以考慮直接找老師討論看看 謝謝你...
※ 編輯: steve42125 (1.169.90.204), 10/29/2017 17:23:35
9F：推 datro: 不用low attach養出來的 我覺得比較像是長太滿成球的 10/30 20:29
10F：推 QuTarh: 我們之前用ultra low dish養得出來或許你們也可以試試看 11/03 12:59
11F：推 abcam: Greiner,BD, Corning 這些大牌子 都有這些特殊盤 問問價格 11/06 22:55
12F：推 exosome: 這些特殊盤都蠻貴的，不彷自己coating poly-HEMA 試試 11/10 00:56
13F：推 ko363630: 自己co的效果都不好，買commerical 的比較方便，至少省 11/14 07:11
14F：→ ko363630: 時省麻煩 11/14 07:11
15F：→ bj59420: 細胞有養歪嗎？重新解凍新的一批試試看？ 11/19 21:21