作者feather2 (飛羽)
看板Biotech
標題[討論] cloning PCR check
時間Mon Oct 23 15:35:57 2017
相信很多版上的大大使用過利用點菌PCR的方式來確認cloning
我會特別選用大於200bp 約500~1Kbp的長度
因為我覺得200bp的長度常常會不確定是不是正確的
另外膠圖上也會確認長度對不對 尤其時濃度夠不夠
長度不對的機率蠻低的 但是濃度太低 其實是偽陽性的機率會有一點高
但是最近被問到利用qPCR來做 這樣更快 也不用跑膠
只是這樣的話 除了要改用很短的設計 也不能確定產物長度 濃度也較不好認定
不知道各位大大有沒有相關的經驗或是想法
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1F：推 ABULA666: 你的實驗目的應該是要挑到正確的DNA片段吧？用qPCR去篩 10/23 15:57
2F：→ ABULA666: 顯得你工具用錯地方，我個人覺得不如先用cloning PCR再 10/23 15:59
3F：→ ABULA666: 直接選有機會送定序，頂多送定序前先用限制酶確認，價錢 10/23 16:00
4F：→ ABULA666: 一定比qPCR試劑低，也不會用到額外的儀器 10/23 16:01
5F：→ feather2: 是cloning PCR 只是我們家有qPCR機器 就被要求用qPCR來 10/23 17:59
6F：→ feather2: 跑cloning PCR 比較快而且不跑膠 聽起來好像也沒錯 10/23 18:00
7F：→ blence: 這叫colony PCR,前面就有個專家#1Ll7Pwcd 10/23 18:12
8F：→ blence: 真好奇是怎樣的人給出這種建議 10/23 18:15
9F：推 ABULA666: 感謝樓上糾正，看文隨手打時總覺得怪怪的XD 10/23 18:45
10F：→ xxtomnyxx: 你知道普通 PCR 和 qPCR 的價格差了多少嗎 XD 10/23 21:50
11F：→ xxtomnyxx: 況且用 qPCR 來做 colony-PCR.....如果用 SIBR Green 10/23 21:52
12F：→ xxtomnyxx: 根本沒辦法分辨是 self-ligation 還是正確 insert 的 10/23 21:53
13F：→ xxtomnyxx: 產物吧？用 TaqMan 的話....我保證你實驗室會破產 XD 10/23 21:53
14F：推 untilnow: 建議你查一下兩者價差 10/23 22:30
15F：推 joseph103331: 定性的實驗用到定量的技術本身就怪了，定量是要花 10/24 00:36
16F：→ joseph103331: 很多錢錢的 10/24 00:36
17F：推 aaaazzzz: 看到b大提的#1Ll7Pwcd，忍不住點進去看看，內容真是太棒 10/24 10:28
18F：→ aaaazzzz: 了！希望常常看到幾位先進分享優質的文章 10/24 10:30
19F：→ feather2: 感謝大大的回應 我也覺得很怪 但上頭這樣問我 我也… 10/24 13:15