作者xy234786 (阿亮)
看板Biotech
標題[討論] loading control
時間Fri Sep 29 01:20:34 2017
我使用這家的beta-actin做為loading controlhttps://www.scbt.com/scbt/product/bet
a-actin-antibody-c4 第一次嘗試去針對陰道鞭毛蟲做western，跟據上面
說明書的比例分別以1比200,1比500,1比1000去hide 結果如下
https://i.imgur.com/Ji9j2HF.jpg
出來這樣很醜的結果，我想請問可能是選錯loading control嗎？又或是比例上的錯誤導
致這樣的結果?
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1F：→ turtle24: marker也呈色嗎？二抗太濃？ 09/29 04:40
2F：→ Ianthegood: 不覺得是二抗耶 那個lane外面都滿乾淨的 可能是PAGE 09/29 05:01
3F：→ Ianthegood: 本來就跑很糟XDDD 09/29 05:01
4F：推 elelith: 你確定這個ab有認陰道鞭毛蟲的actin嗎 09/30 06:34
5F：→ xy234786: 建議二抗用多少呢？ 10/01 19:39
6F：→ xy234786: 不確定 只是拿實驗室唯一的抗體來做 (實驗室沒有人在做w 10/01 19:41
7F：→ xy234786: estern)，沒人知道能不能hide到，我也沒有學長學弟妹@@ 10/01 19:41
8F：→ xy234786: paper上都不太會寫control 抗體的廠商 也不知道怎麼買， 10/01 19:43
9F：→ xy234786: 老師說要補這個control 就好了 應該可以寫論文了... 只 10/01 19:43
10F：→ xy234786: 是卡了一個多禮拜了 10/01 19:43
11F：→ Ianthegood: 良心建議 去找一個專門做蛋白質的lab請他們順手幫你跑 10/01 19:56
12F：→ Ianthegood: 一張膠 10/01 19:56
13F：→ xy234786: 我再跑了一次膠 並分別人我的目標蛋白抗體與beta-actin 10/02 23:43
14F：→ xy234786: 去hide 10/02 23:43
17F：→ xy234786: 結果beta-actin還是沒有band 10/02 23:44
18F：→ xy234786: 我也想 可是大家都蠻忙的 沒人會理你的 老爸又不在 只好 10/02 23:52
19F：→ xy234786: 來這問問看 10/02 23:52
20F：→ xy234786: 老闆 10/02 23:53
21F：→ turtle24: 可以printscreen,再加上一些標示，只看上面那張還以為你 10/03 01:59
22F：→ turtle24: 成功了 10/03 01:59
23F：→ turtle24: 改了什麼條件嗎，只是重跑不可能從很髒變成沒有band啊 10/03 02:00
24F：推 elelith: actin是幾乎零失敗率的 我覺得不是跑膠的問題 你可以考慮 10/03 04:09
25F：→ elelith: 染ponceau 這也是很普遍的loading control 10/03 04:09