作者jazzinfuture (CoM)
看板Biotech
標題[求救] Pichia 的培養基混濁
時間Sat Sep 23 01:19:28 2017
第一次發問 請各位鞭
現在正在使用甘油代謝路徑的噬甲醇酵母菌做蛋白質培養
培養基是BYPG / BMG
分別材料是
BYPG
yeast ex 5g
pepton 10g
glycerol 10ml
phosphate buffer ph6.0 50ml
誘導培養基
10x YNB(YNB + ammonia sulfate)
phosphate buffer ph6.0 50ml
500x biotin 1ml
10ml. glycerol
甘油都是分開滅 biotin等冷了加
但是不知道是什麼樣的問題 冷卻之後都會沉澱東西出來 上顯微鏡看起來不像菌
起初以為是甘油高溫滅菌有問題 就用.22 過濾 還是會有沉澱析出
以前都誘導的出東西 現在都誘導不出來
請大神開示m(_ _)m
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.134.31
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※ 編輯: jazzinfuture (180.217.134.31), 09/23/2017 01:20:53
1F：→ silverberry: YNB 也是用滅的嗎? 是加在其他成分裡滅的嗎?09/29 10:29
2F：→ silverberry: "以前都誘導的出東西" -> 和現在是做不同的蛋白質嗎?09/29 10:30
表現的蛋白質都不變
YNB 1.7g + ammonium sulfate 5g 和 phosphate buffer 丟一起滅菌 甘油另外跟水混合滅
菌 冷卻之後倒一起混合這樣
3F：→ silverberry: 那兇手應該是 YNB10/02 12:09
4F：→ silverberry: 所以誘導的時候培養基就沒有 yeast extract 了?10/02 12:10
5F：→ silverberry: 也沒有 peptone 了?10/02 12:11
6F：→ jazzinfuture: 對10/02 20:48
7F：→ jazzinfuture: 所以... ynb壞了?10/02 20:48
8F：→ silverberry: 之前的經驗是也不是不能用，不過從很營養的培養基10/06 10:37
9F：→ silverberry: 換成很不營養的培養基誘導，有什麼特殊原因嗎?10/06 10:37
10F：→ silverberry: 這樣菌長的還好嗎?10/06 10:38
啊哈哈 推文追蹤沒追到大大回覆
因為前人是遵照expression kit 的說明在走 後面條件也都有找好
是怕菌的代謝路徑走到glucogenpath 就不能行誘導(說明書有原因)
去年學長在誘導的時候都有誘導出來
今年初我做兩輪都有東西 不過活性慢慢的減少 就覺得大事不妙然後開始除錯
菌長不長的好應該不是問題
因為要誘導的條件OD600>=60
※ 編輯: jazzinfuture (180.217.170.154), 10/10/2017 02:46:34