作者es77823 (77823)
看板Biotech
標題[求救] 24well 細胞越種越少
時間Tue Sep 5 23:50:22 2017
想請教版上各位學長姐們
我是實驗室新手
每次種24well 時細胞都會越種越少
步驟如下：
1.將細胞用trypsin，離心再加入1cc medium，後去數細胞
2.種在24well，每1well 30000顆細胞
3.會把算好的細胞數加到內含25cc medium的tube
4.1 well加1cc
我試過用auto pipet 跟 pipet，但每次種24 well完後做mtt時，最後幾格(大約8格左右)的well讀出來的od值都會下降很多
連control 那格都下降很多，所以排除是加藥的問題
想知道這個問題該如何解決，謝謝!!!
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1F：→ e104582001: 細胞沉澱很快，每次在加都要混勻，不然會越加濃度越低 09/05 23:53
2F：→ es77823: 我每次吸6cc，都會用auto pipet再pipetting，然後再吸6cc 09/06 00:02
3F：→ blence: 我會猜是你藥物處理有換到medium,較後面處理的細胞乾死掉 09/06 02:19
4F：→ blence: 如果是分的數量差異,MTT之前就看出來了,不必測OD才發現 09/06 02:20
5F：→ blence: 另外24well用到0.5ml就好,液面太高,對生長也沒好處 09/06 02:21
6F：→ es77823: !!!!原來是這樣，會再修正我的做法的，感謝B大的幫忙 09/06 04:31
7F：推 aj1139: 綜合上面的建議加一點我的做法：細胞混好在tube之後，每 09/06 07:17
8F：→ aj1139: 加完一盤整個tube搖一下混勻，然後再加下一盤，前提是單 09/06 07:17
9F：→ aj1139: 手開關蓋要練好、tube要絕對乾淨 09/06 07:17
10F：→ aj1139: 方便說是什麼細胞嗎？ 09/06 07:18
11F：→ es77823: 因為在練習階段，所以都是學長姐們的細胞，種過3種不同的 09/06 14:33
12F：→ es77823: 細胞，但結果都是細胞數越來越少 09/06 14:33
13F：推 joseph103331: 種細胞後 做實驗前 都養成看顯微鏡的習慣比較好 09/06 20:24
14F：→ joseph103331: 24 well應該還可以透過日光燈看細胞密度 不過前提 09/06 20:25
15F：→ joseph103331: 種得要夠勻 09/06 20:25
16F：→ aj1139: 做完都會看顯微鏡檢查 +1 09/06 21:12
17F：→ tynse71864: 而且24很難搖勻哈哈 09/07 19:43
18F：→ es77823: 嗯嗯會再試試看的!!!!謝謝各位幫忙 09/08 00:54
19F：→ LIAR: 24well我都用1ml耶？一方面避免蒸散的影響，也避免phase 09/10 23:11
20F：→ LIAR: contract中間旁邊差異太大。 09/10 23:11