作者a0976134 (帶螞蟻散步)
看板Biotech
標題[求救] Mycoplasma 和 Black Dot 細胞汙染差異
時間Fri Aug 4 14:37:24 2017
先前進行細胞株培養時 有曾經用過Hygromycin篩選細胞
之後以 Complete medium with 10% FBS and 1% P/S 培養
但最近該細胞株卻有汙染的情況發生
但症狀與Black Dot 和 Mycoplasma 汙染的情況很像
我個人判斷依據是：
Black Dot : 存在於胎牛血清內之物質 高等規格級別之胎牛血清不常見
在高倍率下能以肉眼看到在細胞間有小黑點在點與點之間移動
而並非只是原地打轉（有可能是細胞碎片或是雜質)
Mycoplasma : 症狀輕微時肉眼無法辨別 但嚴重時細胞間有黑色顆粒分佈
細胞培養液底部會有沙狀物質出現 但培養液不變色
兩者汙染嚴重時 都會影響到細胞生理現象
但若是現象輕微時 也能透過每天勤換medium
和多次DPBS清洗的步驟改善此現象
想請問兩者的依據是否是靠此判斷 ?
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已知目前市面上已經有販售Mycoplasma Removal Agent的產品
大概處理時間需要2週 是否處理完後 此細胞就可以進行細胞實驗 ?
至於Black Dot 由於目前似乎都是建議靠多種高濃度抗生素篩選
也有人建議說 遇到此類型汙染就直接丟掉
想請問各位有在做細胞操作的人 大多都是怎麼去處理的?
先感謝各位前輩告知
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※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 14:40:54
1F：→ honey823: (1) mycoplasma應該無法用一般顯微鏡看到 (2) 丟掉吧 08/04 14:50
2F：→ a0976134: mycoplasma 輕微看不出來 但嚴重時培養基底部有沙狀物質 08/04 15:07
※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 15:47:58
3F：推 pichia: PCR 或是dapi染看看，這樣猜也太不科學了 08/04 17:36
4F：推 liumang: 我們實驗室的學長姐說 他們經驗上很難清除 08/04 22:50
5F：→ liumang: 我指的是Mycoplasma 當下殺完後用KIT測是沒有了 但過陣 08/04 22:51
6F：→ liumang: 子又會出現 當然不能排除是其他地方污染 導致重複感染 08/04 22:51
7F：推 hsnuyr: 用過殺mycoplasma的藥但是移除後約一週又會測到 問過原廠 08/06 00:58
8F：→ hsnuyr: 表示那是正常的 原廠建議養在low dose的藥物內或是定期清 08/06 00:58
9F：→ hsnuyr: 除 所以後來買的到的細胞我都直接丟了 除非stable clone 08/06 00:58
10F：→ hsnuyr: 才建議用藥定期處理 嚴重的mycoplasma汙染沙沙的比較像cel 08/06 00:58
11F：→ hsnuyr: l debris 至於藥處理完能不能做實驗我覺得要看實驗而定 08/06 00:58
12F：推 yfw: 經驗談基本上這類中獎 就要丟了 沒可能殺乾淨的 08/07 12:55
13F：推 HaGa5566: 之後培養可試試看Invivogen的Normocin，搭配PS效果應該 09/05 18:43
14F：→ HaGa5566: 不錯 09/05 18:43