作者VincentYan (VincentYan)
看板Biotech
標題[求救] 跑10kD以下的蛋白，推薦何種SDS-PAGE
時間Mon Jul 24 14:59:43 2017
請問版上的各位大大
小弟我有一個蛋白(peptide)的分子量約5-10 kD之間，嘗試很多種Tris-glycine gel，E.
g. 自製的16%或預鑄8-16% gradient gel (GE的，但已停產)，但都一直跑不出來，dye f
ront始終停在10 kD就不能再跑下去了(有用小分子量的protein marker，<10 kD marker
跑得出來)，後來發現原因可能是膠的分離範圍在10kD已是極限了(推測)
最近想改試Invitrogen NuPAGE 4-12%，搭配MES buffer，根據官網(
https://goo.gl/uRa
BjV)表示: 分離範圍最小可到3.5 kD
不曉得有沒有版友試過此預鑄膠，可以分享意見，或是推薦跑10 kD以下蛋白的方法
感恩不盡><
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.190
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2F：推 Ianthegood: 分子量小就不要跑gradient阿 precast 12%跑15kda很ok07/24 15:40
會跑gradient是因為同時還有其他>50 kD蛋白被表現; 跑15 kD ok, 但我要看的是10以下的啊
※ 編輯: VincentYan (140.112.4.208), 07/24/2017 15:58:51
3F：→ aj1139: 自己配18%的啊 07/24 17:23
4F：→ Ianthegood: 12%可以分10kda以下沒問題啦 如果你50k以上也需要trso 07/24 19:41
5F：→ Ianthegood: lution就跑兩張唄 07/24 19:41
6F：推 tynse71864: 16% dye front會卡在10k嗎 (思 07/25 01:10
7F：→ tynse71864: 10以下真有必要可以跑 tricine gel 07/25 01:11
8F：推 alaric: 有用錯dye? 07/25 01:16
10F：推 yfw: 13.5 or 15% 另外要考量sample種類與抗體品牌濃度 08/07 13:06
11F：推 yfw: 還有 要看的蛋白是在核質膜？這也可能是跑不出來的原因 08/07 13:08
12F：→ yfw: 不一定是膠的%數問題 08/07 13:09