作者saphina5545 (sammilololo)
看板Biotech
標題[求救] 脂肪酸如何溶解在培養液???
時間Sat Jun 10 11:30:03 2017
大家好, 目前我正在做細胞實驗
實驗的內容是要用"加了脂肪酸的培養液"養細胞
我們所用的脂肪酸有oleic acid(OA)和palmitic acid(PA)
OA的部分還好,在medium的溶解度ok
問題是在palmitic acid
我們是先用與PA相同濃度的NaOH當作solvent來溶解PA
在這個步驟PA都能夠完全溶解在內
而因為是要餵細胞吃,所以在配置成working solution之前
要先把PA和 BSA conjugate在一起,以模擬在生物體內uptake脂肪酸的形情
但問題來了
這個BSA一開始也是要溶在medium裡面
而PA一旦碰到medium就立馬析出
怎麼弄都弄不散也溶不了
我也找了很多的reference
有人說可以用DMSO
但是我的實驗剛好不能用DMSO......
然後因為我已經盡力去溶解它了 medium還是呈現混濁狀
我不知道他的極限是不是就只能這樣了??
因此想請問板上的各位
你們有遇過類似的實驗嗎????你們都是怎麼解決的呢????
真的很想趕快解決這個問題啊~~~~不然細胞都不能養TT
謝謝各位~~~
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1F：推 joseph103331: 不能用DMSO的原因是什麼呢? 06/10 13:28
2F：→ saphina5545: 因為我的實驗室要看發炎激素的變化 06/10 14:41
3F：→ saphina5545: 之前有聽學長說DMSO會抗發炎(?) 不曉得有沒有聽錯 06/10 14:42
4F：→ saphina5545: 所以擔心會影響我的實驗結果 06/10 14:43
5F：→ saphina5545: 還是其實影響沒那麼大呢 06/10 14:43
6F：推 yuasa: PA的最終濃度多高是重點。會在media裡析出的話，0.1%的dmso 06/10 15:15
7F：→ yuasa: 其實也沒有任何幫助。我的經驗是你要讓PA跟BSA慢慢地conju- 06/10 15:18
8F：→ yuasa: gate，最好能放在55度的水浴兩小時(in NaOH solution)。但 06/10 15:20
9F：→ yuasa: 然後跟media混合時，要慢慢一滴滴地滴下去同時搖晃混勻。即 06/10 15:22
10F：→ yuasa: 使如此，因為PA水溶性真的不好，不太可能用到高於1 mM的濃 06/10 15:24
11F：→ saphina5545: 我conjugate時的PA濃度是2mM 所以是要先降低PA的初始 06/10 15:28
12F：→ saphina5545: 濃度嗎? 我最終要使用的濃度是500uM就好 所以是一開 06/10 15:29
13F：推 yuasa: conjugate時的濃度可以更高，因為是在鹼性溶液裡，溫度夠高 06/10 15:30
14F：→ yuasa: 的話其實溶得很好，500 uM的話我覺得要做到澄清(只有一點點 06/10 15:31
15F：→ yuasa: 濁)是完全可以的。BTW你BSA最終濃度是1%嗎? 06/10 15:32
16F：→ saphina5545: 了解!謝謝你 那請問最後的working solution 06/10 15:32
17F：→ saphina5545: 我BSA和 PA的濃度是1:6 06/10 15:33
18F：→ saphina5545: 是需要最後把BSA調到1%嗎? 06/10 15:36
19F：→ saphina5545: 不好意思 可能回的慢 我還不太會用ptt的介面QQ 06/10 15:38
20F：→ saphina5545: imgur.com/b4GfTe7 06/10 15:42
22F：→ saphina5545: 圖片上的已經是woring solution了 這樣算清澈嗎? 06/10 15:44
23F：→ yuasa: 看起來可以再澄清一點，我有寄站內信給你了 06/10 15:45
24F：→ saphina5545: 我回信了唷~ 謝謝你!! 06/10 15:47
25F：推 tynse71864: 曾經遇過一樣的問題 XD 06/11 18:51
26F：→ tynse71864: 最後是把 FBS拿掉就解決了 06/11 18:52