作者xy234786 (阿亮)
看板Biotech
標題[方法] tricine gel
時間Thu Jun 1 18:32:24 2017
我的實驗是想要跑出Trichomonas vaginalis中六個isoform 之rubrerythrin蛋白，大小
分別是21kDa,19kDa,22.1kDa,23kDa,22.2kDa ，老師說可以跑tricine-gel這種膠來分出
各個isoform， 請問大家有跑過這種要分出分子量相近的實驗嗎？，想要清楚配方以及要
注意的細節
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1F：推 july81212: 只有1D可能分不太出來吧 連SEC都會overlapping 的大 06/01 20:14
2F：→ july81212: 小 不考慮2D嗎 06/01 20:14
3F：推 july81212: 15%膠 60V慢慢跑試看看 之前是分15-19kDa 4個isoform 06/01 20:19
4F：→ Ianthegood: sec本來解析度就不是太高啊 可能要跑capillary? 06/01 20:21
5F：推 tynse71864: 我的蛋白(~16-19kda)有4個isoform, 在 sds page跟 tri 06/02 13:26
6F：→ tynse71864: cine gel結果都分的出來;同1F跑15%gel 跑膠速度正 06/02 13:26
7F：→ tynse71864: 常 06/02 13:26
8F：→ xy234786: 感謝大家 我試試看 06/03 12:31
10F：→ xy234786: 請問一下 為什麼感覺兩個sample跑的速度不一樣 然後到 06/16 14:21
11F：→ xy234786: 下半部的時候 marker的band也變的有點歪斜 我這個膠是 06/16 14:21
12F：→ xy234786: 不是一層8% 第二層10% 第三層16.5%的tricine gel跑的( 06/16 14:21
13F：→ xy234786: 老師要我這樣做) 06/16 14:21
14F：推 tynse71864: 三層應該不是問題 ; 我記得 tricine gel的sanple體積 06/22 18:26
15F：→ tynse71864: 不能太大 (一般建議10以下) 06/22 18:26
16F：→ tynse71864: 下方 Mr歪代表你旁邊 land該處蛋白太多了 擠到隔壁 06/22 18:27
17F：→ tynse71864: 的跑道 06/22 18:27
18F：→ xy234786: 我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不 07/24 19:20
19F：→ xy234786: 我為了避免互相擠壓 分開load了，但跑出的結果還是分不 07/24 19:37
20F：→ xy234786: 開也，頂多就只有一條band，老師說他以前做實驗連50Da 07/24 19:37
21F：→ xy234786: 都分的開，我怎麼分不開@@ 07/24 19:37
22F：→ xy234786: 老師是跟我說第一層跑10mA,第二層15mA,第三層25mA，這 07/24 19:43
23F：→ xy234786: 樣條件正確嗎？ 07/24 19:43
24F：→ xy234786: 樓上t大你當初是怎麼跑的呢？，可以跟你要詳細protocol 07/24 19:50
26F：→ xy234786: 時間... 緩衝液配方等等另外老闆一直說要用Horfer SE28 07/24 19:50
27F：→ xy234786: 0電泳設備跑才分的開 你也是用這設備跑的嗎？ 快畢不了 07/24 19:50
28F：→ xy234786: 業了 希望趕快跑出來 07/24 19:50