作者qmiragep (Mirage)
看板Biotech
標題[求救] MC3T3-E1 骨母細胞貼附問題
時間Wed May 3 20:05:14 2017
本魯目前剛接觸細胞培養
最近在實驗室養了"MC3T3-E1"這株細胞株
Medium 使用的都是文獻上以及參考中文文獻的配方(基本上都一樣)
Flask也是用康寧貼附型細胞專用的(75cm2)
目前遇到一個小瓶頸，
就是利用0.25%的Trypsin-EDTA鏟起細胞，
細胞密度在"七成"時鏟起，
卻只有三成細胞有被鏟起來，
試過用10%Trypsin-EDTA得到一樣的結果
因為細胞算是年輕的細胞，
部分排除細胞老化的可能，
在此跟版上大神們求救><><
有無能將(活)細胞鏟起至少85%的方法
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1F：→ e104582001: 拍盤 05/03 20:47
2F：→ qmiragep: 拍過了，而且不小力 05/03 21:06
3F：→ raiyu: 我用0.05%的trypsin也都還ok 因為是很久以前養過的不太記得 05/03 21:48
4F：→ raiyu: 所需處理的時間 不過應該沒有太難搞所以沒有特別印象 05/03 21:49
5F：→ raiyu: 建議 可以先將飄起的細胞先收起來 再加trypsin作用第2次 05/03 21:50
6F：→ raiyu: 就會很聽話了 不建議硬拍 細胞會"斷手斷腳" 05/03 21:51
7F：推 cyc5566: 我都把T75壓上去vortex 對強壯的cell line很好用 05/03 23:03
8F：→ qmiragep: 我試試看這些方法QQ 05/03 23:34
9F：→ qmiragep: 似乎還是失敗。。QQ 05/06 00:05
10F：→ raiyu: 那你要不要補充一下你的作法 讓大家幫你看看 05/06 21:52
11F：→ raiyu: 或是找前輩看你操作 畢竟隔空抓藥有困難 05/06 22:00
12F：→ raiyu: trypsin回溫太多次失效了?? 05/06 22:03
13F：推 joseph103331: 有些難纏的細胞株可以用Trypsin在37度作用個2~5分鐘 05/08 22:23
14F：→ tz2733: 有先wash過再加trypsin嗎? 05/10 18:56
15F：推 ararthur: PBS wash一次不夠 有沒有wash第二次 05/11 14:35
16F：→ ararthur: 再不行就直接上細胞刮勺 05/11 14:36
17F：→ qmiragep: 非常感謝以上諸位的幫忙>< 目前已經成功了 謝謝=D 05/20 22:05