作者rt87687 (rt87687)
看板Biotech
標題[討論] PRIMER斷裂
時間Wed Apr 19 20:07:33 2017
如題 最近做計畫 設計primer 想找SNP的溫度
在操作的時候送來的primer有被摔到 想請問primer會斷掉嗎＠＠
斷掉後會有什麼樣的結果？
今天跑完PCR後結果是大量的雜band
但是因為我們調的溫度也不是廠商推薦溫度 所以懷疑也可能只是溫度沒調對
或是說會是primer加太多嗎？
謝謝！
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1F：→ blence: tube摔到不會讓prmer斷掉,就像溶水後vortex混合也不會碎掉 04/19 20:14
2F：→ blence: 什麼叫做SNP的溫度 04/19 20:14
3F：→ rt87687: 我們是測定特定基因的SNP最佳反應的溫度 04/19 20:18
4F：→ rt87687: 所以是除非vortex太強烈 不然應該不會是斷掉導致雜band 04/19 20:19
5F：→ rt87687: 嗎？ 04/19 20:19
6F：→ bob79620: primer多大？不過基本上primer很難斷裂吧 04/19 20:21
7F：→ rt87687: 20mer 04/19 20:23
8F：推 aaaazzzz: 雜band多跟PCR設定的條件有關,primer太高也有可能(可是 04/19 20:27
9F：→ aaaazzzz: 沒有寫如何配,也沒人知道是不是真的primer加太多) 04/19 20:27
補上配置的材料
SNP：HER2 rs1058808
總共8個熱血
DNA 1ul
Master Mix 10ul
Primer F/R 1ul
ddH2O 7ul
Total 20ul
溫度條件（Gradient）：52-60℃
※ 編輯: rt87687 (180.176.97.150), 04/19/2017 20:31:02
10F：→ a90648: 寫反映條件時重要的是最終濃度而不是加的體積 04/19 22:20
11F：→ blence: 熱血？全血？ 這樣還能要求很清晰無瑕的band嗎？ 04/19 22:38
12F：→ Ianthegood: sample量/內容沒寫 primer量沒寫 program沒寫 target 04/20 06:31
13F：→ Ianthegood: size多大沒寫 哪個polymerase沒寫 是當板友都會通靈 04/20 06:31
14F：→ Ianthegood: 逆 04/20 06:31
15F：推 a10s07: 請樓下觀落陰去看一下 04/20 13:52
16F：推 andy6001: 哦哦哦 我感應到了，他的primer告訴我他好痛XD 04/20 15:59
17F：推 satantaco: 如果血液樣品沒經過前處理 直接做 雜訊很多很正常 04/21 11:29
18F：→ des1005d: 觀落陰得知primer斷腿了 看到DNA就想黏 04/21 17:03
19F：→ rt87687: Sorry沒有講清楚@@ 血液是已經處理完成DNA了 昨天重做後 04/22 00:20
20F：→ rt87687: 現是primer加太多 04/22 00:21
21F：→ rt87687: Primer確定沒有斷掉 謝謝版友回覆！ 04/22 00:21