作者MLSHBen (酷喔)
看板Biotech
標題[求救] 請問有辦法可以知道某細胞有無表現某蛋白？
時間Mon Apr 3 02:22:12 2017
如題
想請問是否有辦法可以知道某個細胞是否有表現某個蛋白
會問這個問題是因為我碰到下面所述的狀況
我目前遇到的情況是transfect某個X蛋白的WT及其mutant form(都帶有Flag-tag)到293T cell
用Western Blot壓Flag抗體得知都有transfection成功
又知道X蛋白會影響CaMKII及p-CaMKII的表現量
所以想用這同樣的lysate壓CaMKII及p-CaMKII的抗體看mutant form是否會影響他們的表現量
但好像壓不出來
查別的CaMKII的抗體的data sheet好像是293T mock transfection沒有CaMKII的band
(會查別的CaMKII的抗體的data sheet是因為原本的抗體的data sheet是用mouse brain lysate)
所以是否就表示293T cell不會表現CaMKII？
所以就想請問是否有辦法可以查到某個細胞是否有無表現某個蛋白
就我的情況而言就想知道293T cell是否會表現CaMKII及p-CaMKII？
謝謝！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 61.231.4.188
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※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:25:46
※ 編輯: MLSHBen (61.231.4.188), 04/03/2017 02:26:38
1F：→ xxtomnyxx: 拿 293T 的細胞做個 RT-PCR 看看？ 04/03 03:03
2F：→ blence: 一般sheet會用mock/transfect是要呈現Ab真的可以認抗原,而 04/03 03:14
3F：→ blence: 不是未表現,明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用 04/03 03:15
4F：→ blence: 還有遇到mouse的圖時要先確認Ab辨識專一性,別家的難以參考 04/03 03:15
5F：→ blence: 至於標題問題,以array或RNAseq解析數百細胞株expression 04/03 03:21
6F：→ blence: profile的dataset我知道的至少三個,但293T似乎都沒被納入 04/03 03:23
7F：→ tynse71864: 直接換個細胞呢? 如 HeLa或 COS7 04/03 09:46
想請問上面講的「明明視覺效果跟觀感不佳,但有廠牌偷懶就愛用」是甚麼意思？
查ATCC得知293T是human embryonic kidney來的，如果找embryonic kidney是否會表現是否就代表293T會表現？
謝謝！
※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 11:09:14
8F：推 egoweaver: RTPCR看transcription level有沒有還有WB跑個positive 04/03 13:26
9F：→ egoweaver: ctrl吧，視情況而定293T不一定是你的實驗的良好平台 04/03 13:26
10F：→ egoweaver: 是說你的抗體認得到human protein嗎，雖然CamKII人鼠應 04/03 13:29
11F：→ egoweaver: 該有conserve啦… 04/03 13:29
感謝您的建議！
※ 編輯: MLSHBen (140.112.122.57), 04/03/2017 15:38:42
12F：推 lelojack: 拿別人分析MASS的原始資料來看看 04/03 21:39
13F：推 a34021501: 查DNA序列是否有排序過。 04/11 17:48