作者LIAR (玻璃做的大叔)
看板Biotech
標題[求救] 請問如何分析ECM的成分？
時間Sun Feb 26 13:07:17 2017
請問如果想知道細胞分泌且吸附在材料的ECM種類，應該要如何處理？
我有種fibroblast或endothelial cell，雖然試過triton+氨水來decellularized，
但後續的進行就很不順利。如果用螢光染，就是一整片訊號，無法確定
是不是背景訊號，也沒有型態可言，而且不同材料，原本背景也不同。
而我用RIPA像是跑western去收下來，定量幾乎定不到，就算種再多盤，但
lysis buffer也會等比例增加，濃度上不去，目前染色也染不到，
想送mass人家至少希望有band位置才能比database。
請問ECM protein的分析，我應該要怎麼處理比較好？
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"Don't hate the player. Hate the game."
當看到哪個名人賺了大錢，領到高額補助或利息，不要去指責他，
而是要指責那個制度、創造那個制度的人，以及默許那個制度的人。
不然你認為一個人不領18%或是一個人不炒房價，就會改變整體環境嗎？
還不如改變【修改制度的人】，才能從根源改變一切。
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1F：推 tz2733: 我作WB收到濃度太低的sample 會把sample通過濃縮管提高濃 02/26 15:08
2F：→ tz2733: 度 給你參考 02/26 15:08
3F：→ LIAR: 濃縮管要怎麼選？請問哪家有賣？ 02/26 17:10
4F：→ LIAR: 會不會反而卡在管上的反而多？ 02/26 17:10
5F：→ Ianthegood: google amicon 02/26 17:33
6F：→ Ianthegood: mass不能整個sample送嗎 02/26 17:34
7F：推 stampede1215: 濃縮管可以選 Millipore or Sartorius 的 02/26 17:39
8F：推 stampede1215: 至於會不會吸附在膜上就要去要試用來試試了 02/26 17:40
9F：推 tz2733: 濃縮管有依照目標蛋白的size(KDa)分 所以可能要先對你目 02/26 17:48
10F：→ tz2733: 標蛋白size作了解 才不會收錯 至於會不會卡膜上 這我也不 02/26 17:48
11F：→ tz2733: 清楚ㄟ...但好像有出很小體積的款式 降要卡住也卡少一點>< 02/26 17:48
12F：→ tz2733: 找樓上提的那幾家的業務來問問吧~~ 02/26 17:48
13F：→ LIAR: 請問ECM....選200kD以上合理嗎？ 02/26 18:26
14F：→ LIAR: 這邊貴儀有說不能整管送，如果我會操作或是我可以操作也許 02/26 18:27
15F：→ LIAR: 就不會這麼燒腦筋了 02/26 18:27
16F：推 abcam: 小量濃縮 有pall/millpore 02/26 21:19
17F：推 tynse71864: 比較推 M牌 02/27 09:43
18F：推 kaoru7568: pall有eppendorf大小的濃縮管，大一點就15mL tube 03/02 20:48