作者xy234786 (阿亮)
看板Biotech
標題如何改善蛋白aggregation?
時間Sun Feb 5 20:18:30 2017
我要純化的蛋白是利用pET21b送入BL21plus去overexpresssion，並利用column去純化大量的蛋白，此蛋白是陰道鞭毛蟲的rubrerythrin蛋白，它是一種鐵離子結合蛋白，大小連同his tag前後的residue，大概24kDa，而實驗目的是要去結出這蛋白的結晶，分析它的結構，不過，最近發現此蛋白可以大量被細菌表現並純化出來，然而在後面置換及濃縮蛋白的過程中，發現此蛋白相當容易arregation，很困擾，因為如果純化蛋白的質及量不好，便會影響後續養晶的成功性，好困惱啊，我只是碩班生，老師就要我解結構???，各位大大，有沒有什麼辦法解決啊～
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1F：→ milkpa: 本實驗室的研究生也都在解結構，沒什麼。找一下buffer條 02/05 21:42
2F：→ milkpa: 件、改變induce溫度等等，需不需要additive等等，都試試看 02/05 21:43
3F：→ Ianthegood: 看原文expression沒有問題 問題在後面處理 02/05 22:10
4F：→ Ianthegood: 怎麼換buffer的啊? amicon, dialysis? 02/05 22:10
5F：→ milkpa: 從破菌開始就可以換了，不一定要死守單一buffer 02/06 00:21
6F：→ milkpa: 從low salt、high salt、super high salt開始，各種添加物 02/06 00:22
7F：→ milkpa: 都行，方法很多，其實搞不好鐵離子加下去就解決了 02/06 00:23
8F：推 huangsw: 推樓上, 如果已知會跟離子結合 可以的話, 有一點比較好 02/06 13:09
9F：→ Ianthegood: 喔建議要有plan B喔 如果解不出來要有別的東西可以寫 02/06 19:45
10F：→ Ianthegood: 論文XD 02/06 19:45
11F：推 darit: 增加Glycerol的濃度5~10% 或者加長或縮短蛋白長度 02/16 00:51
12F：→ darit: 加2-ME或TCEP對某些蛋白也有幫助 02/16 00:51