作者kerber56 (kerber)
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質透析一直沉澱
時間Wed Jan 18 19:36:27 2017
如題
小弟表現一個蛋白
原本溶於8M urea
進行透析到4M就開始沉澱
到2M 都沉澱差不多了。
用的是PBS+10%甘油+0.1mM EDTA +0.1mM pmsf PH=8的透析液
不把尿素透到0就無法進行下個實驗
有哪裡可以改善嗎?謝謝
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1F：推 Ianthegood: 溫度？ 01/19 03:45
4度c
2F：推 huangsw: 你的蛋白有雙硫鍵嗎? 01/19 10:01
有 兩個
※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 22:59:55
3F：→ Ianthegood: 可以試試室溫 有些蛋白怕冷 01/19 23:12
謝謝您 我會試試
※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:04
※ 編輯: kerber56 (223.139.157.29), 01/19/2017 23:48:17
4F：推 huangsw: 如果你起始在8M Urea, 請用re folding的概念去處理 01/20 14:44
5F：→ huangsw: 濃度不宜高, 不同分子間雙硫鍵接起來恐怕也不是你要的 01/20 14:44
6F：→ huangsw: 另外，如果是E. coli表現的, 雙硫鍵有很大機會是錯的 01/20 14:46
7F：→ huangsw: 記得多做實驗確認一下. 不然投稿會被戰翻... 01/20 14:47
8F：推 Ianthegood: 對耶完全忘記你這是refolding 01/20 19:15
9F：→ Ianthegood: 你如果要做biophysics的話 做refolding真的好嗎? 01/20 19:16
10F：→ storm780121: 有his taq嗎？有的話可以嘗試on column refolding 01/21 17:14