作者s9527543 (s9527543)
看板Biotech
標題細胞存活率實驗問題
時間Thu Jan 12 14:24:45 2017
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
我目前是大二上剛結束,進實驗室也有2個月開始跟實驗到現在有些問題不太了解,也找不
太到合理的答案所以在這邊問一下,實驗室目前是在做藥物促進細胞凋亡來抑制癌細胞生
長的實驗,現在剛接觸到細胞存活率實驗MTT,實驗步驟是:
種細胞在24well>>>貼附16小時>>加藥後分別等24,36,48小時以MTT測細胞存活率,有些問
題想請教:
(1)MTT的濃度是5mg/ml,作用時候會用DMEM以1:9的比例稀釋配成 300ul/well加到
24well反應1小時,但是在收24小時時間點時候的 control組,570nm測OD值一定會out,這
麼一來就沒辦法很準確判斷 24小時IC50,種細胞是25000/well,但是也不能將細胞數降
太低請 問有什麼辦法可以解決?
(2)下藥24well為1ml的DMEM含不同同度的藥物,如果說1ml的劑量只能 維持到36小時,而
48小時OD開始回升,那為什麼不直接把劑量提高 就好呢?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.128.65.187
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1484202288.A.F37.html
1F：推 Bows: 1. 降細胞數 or 增加回溶MTT的溶液的體積(DMSO or 1%SDS) 01/12 17:42
2F：→ Bows: 48 hr OD是什麼OD? 提升劑量會增加 mistarget 的風險 01/12 17:44
3F：→ Bows: 另外有些藥就是放到一定時間就會壞掉 01/12 17:45
4F：→ a90648: 藥會失效就看要12或24小時換一次含藥的medium阿 01/12 17:51
5F：→ a90648: 直接提高劑量那低濃度的效果不就沒data? 01/12 17:53
6F：→ s9527543: 所以DMSO用量沒有固定的意思嗎 01/16 15:07
7F：→ tynse71864: DMSO太多細胞會掛喔! 01/19 09:10
8F：→ s9527543: 我是指MTT之後 用DMSO去溶解紫色結晶這部分 01/19 16:27