作者whatupmen (jia)
看板Biotech
標題[求救] Transfection 的問題
時間Fri Dec 9 00:52:24 2016
各位 前輩們你們好
小弟最近 有做transfection
把一個 帶有microRNA的plasmid 轉染至癌細胞中,這是實驗室第一次做這類的實驗，然
後有些疑問想問問大家，我使用的是jetPRIME 的藥劑。
我一直有個疑問，reagent：DNA的比例，DNA的單位都是ug，但我的plasmid是用kit的elu
tion buffer回溶，如果抽取plasmid濃度不同如：1000ng/ul 或 200ng/ul，假設同樣tra
nsfection DNA濃度都是 1ug ，這樣一個加1ul一個是5ul，同樣是轉染1ug一個細胞要再
多承受4ul的elution buffer(plasmid 回溶)，不知道會不會對細胞產生毒性，還是說沒
有差？
也順便問問各位如果transfection時，plasmid濃度都大概多少？
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1F：→ blence: elution buffer一般都是水或Tris buffer阿 12/09 00:56
2F：→ blence: 如果擔心,何不用elution buffer調成濃度一致 12/09 00:56
3F：→ whatupmen: 我後來就有把濃度調成一樣，當然plasmid抽出來時濃度越 12/09 01:14
4F：→ whatupmen: 高越好，代表要加入細胞的體積比較少，但想問問各位 tr 12/09 01:14
5F：→ whatupmen: ansfection前，抽plasmid的濃度都多少 (一直擔心elutio 12/09 01:14
6F：→ whatupmen: n buffer在細胞含量太高 哈哈) 12/09 01:14
7F：→ a90648: 你就想想水和tris要多少才會造成細胞毒性？ 12/09 12:59
8F：→ xxtomnyxx: 用 mini 和 midi 抽的就算用同樣的 buff 調成一樣濃度 12/09 15:38
9F：→ xxtomnyxx: ，做 transfection 效率也會有差。如果可以盡量都用 12/09 15:39
10F：→ xxtomnyxx: midi 抽到的 DNA 來做。Mini 抽到的通常沒有 midi 純。 12/09 15:40
11F：→ tynse71864: 我都調成1ug/ul耶 至多0.5ug/ul~ 12/09 18:31
12F：→ tynse71864: 我都抽 maxi 12/09 18:32
13F：→ MDCCLXXVI: elution buffer會是無菌的嗎？ 12/10 08:10
14F：→ tynse71864: 會過.22 fil ; kit組附的理論上是 (TE也不太會長東西 12/10 13:08
15F：→ tynse71864: 吧 12/10 13:08
16F：推 GG810424: 抽midi or maxi 1ul 2ug 以上 看下多少再調整 12/22 11:36
17F：→ GG810424: 可以fb 搜尋 G葛格的生命科學小教室 12/22 11:37
18F：→ GG810424: 歡迎來發問踢館 12/22 11:37