作者lb00202549 ()
看板Biotech
標題[求救] transfection的效率可持續多久？
時間Thu Dec 8 14:03:51 2016
用lipofectamin 2000做transfection來over expression gene，第一次是收48hr的6cm dish量的細胞跑WB，效果非常好，無論是293T或是lung cancer cell都很好。
但是第二次做的時候，條件改為48hr的時候將6cm dish culture放大到10cm dish等待長滿後收下protein跑WB，發現完全跟control的表現一樣...完全沒有over expression...
不知道問題出在哪裡...
是不是因為經過一代culture，所以....失效？
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1F：推 sdjk: Transfection送進去的都因為繼代稀釋掉 12/08 14:28
2F：→ sdjk: 直接用10cm半滿transfection? 12/08 14:28
3F：→ xxtomnyxx: 要看你用的細胞還有 vector，以及有沒有做 selection 12/08 14:46
4F：→ xxtomnyxx: 建議你用一樣的 vector 表現 EGFP，這樣你就可以用螢光 12/08 14:46
5F：→ xxtomnyxx: 追蹤細胞表現的狀況。 12/08 14:47
6F：推 nellnell: 看你描述是transfect 48小時後放大到10cm dish, transie 12/08 18:56
7F：→ nellnell: nt transfect最佳表現是24-48小時, 中間經過一次繼代, 12/08 18:56
8F：→ nellnell: 又放兩三天等他長滿, 效力過了沒表現很正常吧 12/08 18:56
9F：推 tynse71864: 我通常30h就收了 最多48h 12/08 19:16
10F：→ untilnow: RTFM 12/09 11:25
11F：推 GG810424: 四到五天都沒問題，看plasmid,看gene 類型,跟dish size 12/22 11:39
12F：→ GG810424: 無關 12/22 11:39