大家好 小弟在實驗上需要使用MC/9這株細胞(mouse liver mast cell, IL-2 dependent) Medium為 RPMI1640 + 10% FBS + 10% T-STIM + L-Gutamine + 0.05 mM 2-ME 從ATCC購買後第一次解凍就發現ATCC凍管的存活率偏低 解後第一天觀察大約只有20%~30% 之後也是有長回來且生長速度正常 但是目前又碰到同樣的問題 在建立cell bank時發現 自己凍存的細胞存活率極低(最高接近10%...很多只有3%以下) 不管使用生長的medium或FBS, DMSO 5%~10%都測試過 試是過凍存前一天更換一半左右的新medium 也試過以前ATCC推薦凍存B lymphoblast的方式(凍存液、漸凍盒預先降溫+低溫離心) 但情況...沒有任何的改善 因為同時有操作其他一般癌症細胞株 凍存與解凍都是正常的 所以凍存系統or試劑應該是沒問題才對 在凍存前(凍管進漸凍盒)或是解凍當下算過存活率都很正常(80%以上) 但是隔天就是幾乎是全軍覆沒的情況(也試過50%的舊medium) 有耳聞cytokine dependent的細胞很難凍 但是目前的情況...實在很難接受 麻煩有經驗的大家能夠提供點建議了<(_ _)> 不祈求能有80%存活率...但希望能有ATCC凍管的水準 非常感謝 --

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