作者tumourjoke (毒瘤)
看板Biotech
標題[求救] 抽RNA 加75%EtOH離心後無pellet
時間Fri Oct 7 19:04:19 2016
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
小弟用實驗室的protocol抽RNA 基本上是phenol-chforoform法
目前做到最後面幾步
等待清洗用的酒精揮發後將pellet用純水回溶 →
測定RNA濃度
由於 260/230大於2.5認為是酒精還沒乾就回溶 於是再加入75%EtOH 並且離心
打算重來一次清洗的步驟
到這邊還算正常 之前的RNA pellet存在且大小OK
結果離心完發現管子裏頭沒有pellet
大崩潰!!! 求助!!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.95.203
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1475838264.A.22B.html
1F：→ a90648: 要補鹽類啦 不然無法沉澱出來 10/07 20:20
2F：→ tumourjoke: 不是很懂要補鹽類的意思 10/07 20:28
3F：推 huuban: 我們沒看到pellet都繼續做，溶下去就有了XD 10/07 21:20
4F：→ huuban: 一樓應該是指要加十分之一體積的3M NaOAC? 10/07 21:22
5F：→ a90648: 就是樓上說的!! 可以另外去估狗LiCl 10/07 22:20
6F：→ sunorange: 我們都加 glycogen 。比較不會影響後續的實驗 10/07 22:41
實驗室用的protocol裏頭有一步驟即是加上1/10體積的NaOAc
不過教導實驗的助理沒有說明過原理 感謝各位的信息提供!!
※ 編輯: tumourjoke (140.114.95.203), 10/07/2016 23:23:37
7F：推 darrenyo: 借串請問一下 TRIZOL抽的protocol中 倒掉isopropanol後 10/07 23:41
8F：→ darrenyo: 就直接加75%EtOH 不用補鹽類的原因是? 10/07 23:42
9F：→ sunorange: 其實步驟中有提到 ，細胞或是組織少的時候 。可以加NaO 10/08 00:03
10F：→ sunorange: AC，幫助沈澱 10/08 00:03
11F：推 Ianthegood: etoh>70%+高鹽 鹽會把水搶走 讓核酸沈澱 glycogen只是 10/08 19:14
12F：→ Ianthegood: 稀釋體積比較好pipet 10/08 19:15
13F：→ Ianthegood: isopropanol後的沈澱本身就很多鹽 70%etoh反而是要把 10/08 19:16
14F：→ Ianthegood: 太多的鹽洗掉 10/08 19:16
15F：推 ararthur: 260/230>2.5是酒精沒乾就回溶? 哪裡查到的阿? 10/10 13:02
16F：→ ararthur: 核酸溶解度:低鹽>高鹽;70%EtOH>100%EtOH>H2O 把握這原則 10/10 13:03
17F：→ ararthur: 即可 至於glycogen和linear acrylamide則是替小片段核酸 10/10 13:03
18F：→ ararthur: 和少量核酸增加沉澱機會而已 例如tRNA或oligo等等 所以 10/10 13:04
19F：→ ararthur: 坦若本來就沉澱得出來 加此兩項 意義不大 10/10 13:05
20F：→ ararthur: 另外上面提到LiCl 有人說不適合小片段RNA 並可能抑制RT 10/10 13:12
21F：→ ararthur: 所以請斟酌使用 10/10 13:13
22F：→ WinnieDad: RNA和DNA所須使用的phenol pH值也不同，要注意。 10/17 20:46