作者nicolehui (hui)
看板Biotech
標題[求救] shRNA lentiviral infection的問題
時間Mon Sep 12 11:03:11 2016
我是依照RANi core的protocol先用293T cell做病毒液（使用TransIT-LT1系統），接著加polybrene和先前製作的病毒液做shRNA knockdown infection到P19 cell。
一開始都長得好好的，因為我想收細胞做western blot確認是否knock down成功，但是我一使用trypsin後，細胞就飄著不貼了（連作為control的shGFP也是）。也有試過直接收原盤的細胞，但不知道是不是因為polybrene的關係，刮細胞的時候整盤稠稠的。
想請問一下有沒有人也遇到同樣的問題，或尋求可能我哪裡出錯了。
ps. 我沒有用puromycin篩選細胞
-----
Sent from JPTT on my iPhone
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.113.206.159
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1473649393.A.980.html
1F：推 melaleuca: 之前做沒有這樣的問題耶.. 你的Polybrene濃度放多少啊 09/12 13:03
2F：→ melaleuca: ？ 09/12 13:03
3F：→ nicolehui: 我polybrene的濃度放8ug/ml 09/12 17:17
4F：→ nicolehui: 那你是直接收原盤的細胞嗎？ 09/12 17:17
5F：推 darrenyo: 有做過polybrene毒性測試嗎? 09/12 17:25
6F：→ nicolehui: 沒有耶！但我在infection隔天換新的medium後到trypsin 09/12 17:45
7F：→ nicolehui: 前都還長好好的。這樣可能是polybrene的濃度太高嗎？ 09/12 17:45
8F：推 darrenyo: 不確定耶..沒遇過這狀況 只是我之前做 RNAi core建議 09/12 18:28
9F：→ darrenyo: 做之前先做polybrene毒性測試 網站上也有protocol 09/12 18:28
10F：→ nicolehui: 好的！我來做polybrene的毒性測試，謝謝你！ 09/14 10:30
11F：推 cocoHsuan: 去問問你家學長看看吧 09/30 17:27