作者gryffin (gryffin)
看板Biotech
標題[求救] 關於利用抗性基因篩選轉型珠的問題
時間Tue Aug 30 09:17:19 2016
各位前輩好
小弟最近在篩選轉型珠時不時會遇到一個問題
在此提出望有類似經驗者可以一起討論、解答
我將目標基因
以兩個序列不同的切位
放在帶有抗性基因的質體上
並轉型後藉由抗生素培養基進行篩選
但在含有抗生素的培養基上得到菌落後
對 14 顆菌落 Colony PCR 都沒有目標基因（Positive control 顯示 PCR 沒有問題）
同時我有做一個未放質體的轉型 Negative control 在抗生素培養基上沒有菌落，所以抗生素應該沒有問題
那就奇怪了@@
請問有人有相關經驗嗎
謝謝
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1F：→ blence: 這很正常阿,那顆plasmid沒切乾淨 08/30 09:58
2F：→ roy047: vector自接, 所以沒有insert 08/30 10:05
3F：→ lail: colony PCR false negative，不死心就抽mini再做一次PCR 08/30 12:21
4F：推 lyu0001: 一樓正解 還有insert 切不完全 加太少 也有可能 08/30 16:26
5F：→ gryffin: 可是我有切膠純化，還是說還是有可能純化到沒切到的嗎？ 08/31 00:58
6F：→ Ianthegood: 個人經驗是 細菌會做很多亂七八糟我們還不知道的事 08/31 02:33
7F：→ Ianthegood: 看你是想要把你的plasmid做出來 那就多做幾次XD 08/31 02:34
8F：→ Ianthegood: 反正你只需要一顆對的 08/31 02:35
9F：→ Ianthegood: 還是你想鑽進去研究可能發生什麼事情 也許下一個諾獎 08/31 02:35
10F：→ Ianthegood: 就是你 08/31 02:36
11F：→ Ice9: 用什麼RE？處理程序如何？RE端有多幾個bps？ 08/31 06:58
12F：→ gryffin: L大說的也是啦XD 08/31 22:06