作者s992003 (Lord of Ethanol)
看板Biotech
標題[求救] western blot 重下不同二抗
時間Mon Aug 29 07:50:28 2016
各位大大早安，手機發文抱歉
小弟想問的是
小弟用anti his-tag的抗體偵測sf9細胞株
沒有進行蛋白質定量，大約使用90% T75的細胞數
使用BCIP+NBT呈色
有加長呈色時間，但是完全沒有band出現
但是聽說正常來說細胞做anti his-tag呈色都會有東西跑出來（學長姐之前做也是說會有
一些些雜band）
猜測二抗本身有些問題
原因是二抗上次用到剩下約3ul
感覺還可以做個幾次
但沒想到下次做實驗就乾了
小弟拿去稍微離心結果跑出大概30ul...
可能都是水了！？
想問說我這片膜還可以洗ㄧ洗再下一次新的二抗嗎
因為如果照理論的話我的樣品蛋白跟一抗還卡在膜上
不知道有沒有大大這樣做過
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1F：→ grox: 可以 只是算是偷懶方法（有次懶得stripping 直接下成功過） 08/29 08:25
2F：→ lail: 可以啊，不過eppendorf從冰箱取出本來就要稍微spin down啊… 08/29 12:52
3F：→ nellnell: Stripping也不用很久阿 大概10-15分鐘 再用TBST洗一下就 08/29 13:06
4F：→ nellnell: 可以重新上抗體了 08/29 13:06
5F：→ tynse71864: 直接上就好 第一次沒訊號表示根本沒抗體黏上去 08/29 14:05
6F：→ jsi: 題外話，"正常來說細胞做anti his-tag呈色都會有東西跑出來" 08/30 22:13
7F：→ jsi: 不是有特定表現His-tag protein的情況才可能會偵測到band嗎? 08/30 22:16
8F：→ jsi: 所以一般細胞株偵測不到band應該才是正常的吧? @@? 08/30 22:18
9F：推 FYT0429: 可以二抗直接上，stripping後從blocking開始也行 09/09 15:26