作者NCKUM (成功大學醫學)
看板Biotech
標題[方法] starvation
時間Sun Jul 31 00:31:48 2016
我實驗是為了看knockdown這gene A是不是不會幫助protein B釋放出到medium
再利用ELISA測某個protein B
我之前有測過control和knockdown我的gene A
在starvation 24h下control測到我想看到的protein B比knockdown高
而在沒starvation也是
但是control比knockdwon在starvation非常明顯差異
而沒starvation下只差異一點點
請問我現在要做protein B的signal
我要比較 control 比knockdown 下游signal 和 在kncokdown組加回protein B
也就是 control & knockdown & knockdown+protein B
我實驗設計是 早上先種細胞 晚上starvation 隔天早上就直接加protein B不換medium
(因為換掉 他釋放出來的protein B就被我換掉 還是再換一次新的serum-free medium?)
24小時候直接收lysis
還是有更好的方法
感謝
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※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 00:32:49
※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 08:19:36
1F：推 tynse71864: 我會直接加 換了會影響 07/31 18:48
2F：→ tynse71864: 但你的 protein B 要加進去的體積是？ 07/31 18:48
1ml 加8ul 在6-well
3F：→ tynse71864: 還有 B加進去的時間； 短時間的話冰的/有點大體積的 B 07/31 18:51
4F：→ tynse71864: 加進去會影響到其他的事情 07/31 18:51
抱歉 沒說清楚 因為我看到在starvation時候 control 比knockdown組的function assay
和一些function protein很明顯差異
在knockdwown這組 protein B 無法被釋放出來
而在ELISA測到或許是protein B影響function, knockdwon geneA 無法釋出protein B
所以就想在knockdown組加protein B 回來來對比knockdown alone組
想說在starvation環境下加回protein B (protein B加下去開始算24小時)
但是前天starvation時間在加protein B 不換medium 這樣算好像超過24小時(還是沒差?)
5F：→ Ice9: 隔天早上 [prot-B] 和外加了 prot-B 之後理論上的 [prot-B] 07/31 19:04
6F：→ Ice9: 會差很多嗎？ 07/31 19:04
加protein B recombinant protein 一定會比自己釋放出來的還強
※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 19:58:28
7F：→ blence: starvation目的是什麼?是除去血清或細胞週期或只是先前試 08/01 06:58
8F：→ blence: 出的最佳實驗條件? 08/01 06:59
9F：→ blence: 另外,你的knockdown是上述什麼starved時間點前後做? 08/01 07:06
10F：→ blence: 以及不考慮加B那組,單純有無kd會starved後多久看function? 08/01 07:07
11F：→ blence: 在不考慮上述問題時,我會在剛starved時就加protein B 08/01 07:09
12F：→ blence: 因為starvation會造或kd後極大差異,想加B就是restore目的 08/01 07:12
13F：→ blence: 這樣,也沒有加B前要不要更換medium的問題 08/01 07:15