作者chirpspeep (吱吱)
看板Biotech
標題[求救] 細胞長起來幾天又莫名死掉
時間Wed Jul 13 17:34:26 2016
為了製作單株抗體，而在學校的某一棟系館篩選出一批融合瘤細胞株
凍存在-80約一個月之後，利用乾冰帶回自己的系館。
在放進液態氮前，想說解凍確認一下存活率
但解凍細胞就一直失敗
細胞剛解完看起來非常圓
隔天可以看到約有三成細胞貼附，其他細胞多半死亡
換掉medium之後，再隔天可以看到有貼的細胞都有分裂
就在有點放心的時候，隔天就會突然全部死光，毫無預警
因為這批細胞很重要，我們特地買cell banker凍存液，也利用漸凍盒
每管細胞量都至少有 2x10^6 cells/mL
解凍細胞是直接把凍管放到37度C水浴一分鐘，補 medium 到 5mL
300g 離心 8 分鐘，再用新的 medium 回溶，隔天也一定會換 medium
用同一罐 medium 養細胞的老師養的有活
培養箱裡的其他細胞也都有活
就只有我的細胞沒有活......
請問有人有發生類似的情況嗎?
如果是一開始就凍壞，或是細胞在運輸的過程中升溫導致冰晶出現，
那細胞還會生長分裂嗎？
總是先分裂一陣子，讓我覺得沒事之後馬上死光光啊！！！！
還是有可能會是汙染嗎？
（但medium沒有變色、混濁等現象，顯微鏡下看也沒有不明物體)
拜託大家了
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1F：推 cyc5566: 不要換medium試試看，或直接問老師他的步驟 07/13 21:55
2F：→ chirpspeep: 老師用他的方式幫我做也解不開QQ 07/13 22:31
3F：推 osla30: 37度後直接加medium培養別離心，隔天再換medium？ 07/13 23:12
4F：→ audry729: 不要離心+1，因為解細胞要快才行 07/14 20:35
5F：→ Liat: 如果一定要離心，可考慮把medium增加到10ml再去離 07/15 00:17
6F：→ chirpspeep: 謝謝各位幫忙，但我沒離心細胞還是出現一樣情況QQ 07/19 14:19
7F：→ chirpspeep: 還是有活，但也是隔天馬上死掉QQ 07/19 14:22
8F：推 qumai: 有聽過hybridoma存的時候細胞數不能太高的說法 07/19 15:01
9F：→ qumai: 融合瘤不是浮游細胞嗎@@ 我養都不會貼 07/19 15:04
10F：推 roc0860: 你的血清正常嗎 07/24 20:27
11F：推 michealking: 不要離 解75T+10ML medium 07/31 21:50
12F：→ chirpspeep: 我最後不離心、試了三種medium終於養起來了謝謝大家！ 08/05 22:21
13F：→ chirpspeep: 不過我的融合瘤會貼耶，但pipet就能把細胞打起來 08/05 22:24