作者FYT0429 (FTY429)
看板Biotech
標題[求救] 細胞核質蛋白分離定量
時間Wed Jun 1 13:52:35 2016
嗨大家好：
敝人正從事關於蛋白質從細胞膜轉位到細胞核(nuclear translocation)的研究。
要觀察這個蛋白質入核的現象，我目前採用兩種實驗方法：
1. 核質蛋白分離後，做Western blot
2. 螢光染色 (immunofluorescence)
想請問有沒有其他建議的實驗方法，也適用"觀察蛋白質入核"這個現象？
感激不盡！
祝大家實驗順利。
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1F：→ a90648: 3目標蛋白接GFP做live image?06/01 15:17
2F：→ a90648: 多打了3...06/01 15:17
3F：→ hitmd: 同一樓，這方式最直接 06/01 17:46
4F：→ lail: 不過有的蛋白質接上螢光後行為會改變06/01 22:15
嗯嗯，做個fusion protein也沒問題，只是之前跟教授提過，她覺得GFP這麼大顆，入核的?
※ 編輯: FYT0429 (1.171.57.236), 06/01/2016 23:46:12
5F：→ Ice9: 你查一小有關EGFR還是FGFR的文章，應該有參考價值。06/02 06:46
6F：→ Ice9: 另外有種作法，如果將已知的入核序列破壞，應該可以阻入核。06/02 06:48
7F：→ Ice9: 再則，如果條件合適，可以試試in vitro import assay。06/02 06:49
8F：→ Ice9: GFP 不太建議。若要做，可以考慮中間弄個「合適的」linker。06/02 06:51
感謝回覆。
我已經做了NLS mutated construct，GFP和invitro import assay我再看仔細一點：)
※ 編輯: FYT0429 (223.137.122.32), 06/02/2016 16:20:52
9F：→ Ice9: 對了，還要注意細胞是否會自然生成membrane或nuclear兩種產 06/02 17:28
10F：→ Ice9: 物。觀察手段方面，大概就你說的WB和IF兩種了。 06/02 17:32
11F：→ Ianthegood: gfp進核是肯定沒問題啊 06/04 02:29