作者s992003 (Lord of Ethanol)
看板Biotech
標題[求救] SF9細胞株培養問題
時間Tue May 17 15:50:53 2016
爬文好像沒看到有人有這個問題
小弟最近剛培養的SF9型態上不太正常，有橢圓還有長條狀，甚至還有些特別大(確定不是
污染)
但是還是硬把它繼代下去，想說看會不會越來越健康，但是結果時好時壞
我在解凍之後分了四代，繼代兩次之後長的比較好(大小形狀較一致，圓形)
想說應該穩定了，結果再分下去型態又開始怪怪的
起初有想過培養基有問題(一個月前配製)，但換了培養基之後還是一樣
想說可能那批凍的細胞比較不好，所以有解凍另外一批看看，也是一樣的情形
小弟的培養基是
grace 90%
FBS 10% (57度煮30分鐘)
PS 1%
解凍方式
取出液態氮的細胞，在27度水浴下迅速解凍至細胞尚有少許冰晶
吸出細胞至離心管，加入10ml預熱的培養基
離心，去除液體，再加入10ml預熱的培養基，將細胞沖散
再次離心，以去除抗凍劑，接著去除液體，加入10ml培養基沖散並且注入T75 flask中
放入27度培養箱中
一小時之後換新的培養基，接著20小時後再換一次，24小時再換一次，細胞就長的差不多
了
繼代方式是用手拍下來再分盤
小弟目前是懷疑溫度的影響，第一個是培養箱開門之後由於細胞培養房的溫度較低，培養
箱會降溫一點，接著為了維持設定的溫度會再升回去，只是升溫後不會剛好停在27度，會
升到28度左右再慢慢降回去，所以整個恆溫系統在開培養箱之後會暫時不太穩定
另外是細胞培養房的溫度都是在22度左右，不知道在外面操作時間稍微長一點是否會導致
培養基變冷，還有拿出來的細胞感受到的溫度也太低，只是實驗室培養的其他細胞株都養
的好好的，所以也不確定這個因素有影響
由於現在實驗室SF9只剩小弟在養了，也不知道如何是好
上網找不太到答案，有阿豆仔說如果細胞庫存夠多，不要花時間把細胞養好，解凍健康的
細胞比較好，但小弟已經試過三批細胞了，感覺情形都差不多
細胞不健康就不能繼續做下去…囧
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.83.204.98
※ 文章網址: https://webptt.com/m.aspx?n=bbs/Biotech/M.1463471455.A.E76.html
1F：推 osla30: 試試解凍後直接加培養基培養，隔天再換培養基，避免離心 05/17 17:43
2F：→ osla30: 傷害 05/17 17:43
3F：推 osla30: 抗凍劑隔天再清除就好，我覺得傷害沒離心那麼大 05/17 17:46
4F：→ vetvet: 細胞凍存量不多的話先放到25T的長滿了再換75T， 05/17 18:05
5F：→ vetvet: SF9解凍不需要離心去抗凍劑，可以等他長好了，直接換液 05/17 18:05
6F：→ vetvet: SF9很好養，Grace建議買商品化的medium，自己泡非常麻煩 05/17 18:08
7F：推 jabari: 可以試試...用隔空沖的方法收集細胞 不輸拍拍 05/18 05:28
忘記回各位大大sorry
後來小弟有嘗試解凍細胞的步驟不要離心，但好像也是沒有長的很好
所以可能細胞本身真的就不是那麼健康
我們的Grace也是買現成的再加血清跟抗生素~
另外用沖的方式好像細胞還是抓的很緊...最後還是用拍的它們才願意下來囧
※ 編輯: s992003 (123.205.21.232), 05/26/2016 21:25:42