作者ad1980 (吱吱)
看板Biotech
標題[求救] WB protein ladder 反光
時間Sun May 15 12:24:31 2016
大家好，又來請問 WB 的問題，
我同時做 primary antibody incubation 了三張 membrane，
antibody 都是 re-used 的前幾次做都沒問題，
protein ladder 加的量也都沒變，
但是昨天做的兩張，protein ladder 反白（如圖）。
http://imgur.com/jhDjesJ
請問有沒有人知道這是什麼原因嗎？感謝。
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1F：推 tynse71864: 記得是訊號太強爆掉 05/15 13:00
2F：→ ad1980: 爆掉不是右邊全黑的那點嗎？我的如果爆掉在 membrane 上可 05/15 14:08
3F：→ ad1980: 以看到焦掉，但顯影會全黑不會反白，protein ladder 從 m 05/15 14:08
4F：→ ad1980: embrane 肉眼看沒焦，不會比右邊那塊黑點訊號強。 05/15 14:08
5F：推 tynse71864: 你搜尋板上 “反白” ，可能可以找到一些原因 05/15 14:45
6F：推 Ianthegood: 我以前反白也是爆掉 但是你的condition都跟之前一樣吧 05/16 07:58
7F：→ blence: unstain ladder? ECL從頭用到尾? Rab? membrane reprobe? 05/16 19:35
8F：→ blence: marker不像是燒掉 (反而倒數第二marker位置的band燒掉了?) 05/16 19:36
9F：→ ad1980: 我的 condition 跟之前一樣，有一張一起做的沒這種情形。 05/17 01:09
10F：→ ad1980: 爆掉是倒數第二大黑點的那個沒錯，marker 應該不是爆掉， 05/17 01:09
11F：→ ad1980: 但不知道為什麼會反白。 05/17 01:09
12F：→ ad1980: Marker 是 prestained，ECL 每張 membrane 都有還新的， 05/17 01:10
13F：→ ad1980: 不是 reprobe。 05/17 01:10
14F：推 michealking: ECL下的不夠均勻 累積在那也會這樣 05/17 16:19
15F：→ ad1980: Stripping 完後 reprobe，ladder 的反白消失了，只是我一 05/19 02:36
16F：→ ad1980: 直都用同樣的步驟，同樣的方式去泡 ECL，不知道為什麼就這 05/19 02:36
17F：→ ad1980: 兩張出現這個問題。@@ 05/19 02:36