作者wishforever (wishforever)
看板Biotech
標題[求救] gibson assembly
時間Wed May 4 17:30:16 2016
我想要問一下 gibson assembly 過程中有沒有什麼特別需要注意的
我的vector大概7kb insert大概2.5kb
因為接了快十次都沒成功
primer由網路上NEbuilder設計 cover的位置有再三確認過
當中也換了幾次primer都沒成功
inser跟vector是由PCR clean up純化 純化後回溶在水
純化後有在跑膠check
反應時間為50℃反應2小時 直接transform到DH10b
vector濃度大概100ng/ul 取1.5 insert也大概100ng取 4.5
Gibson assembly取6 不補水直接反應
長出來的菌數大概50顆左右 但都沒有預期片段
因為有同時利用其他方式在clone 其他基因 那邊就很順利
不知道gibson assembly有什麼地方需要特別注意的嗎?
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