作者lackgirl (愛幻想)
看板Biotech
標題[求救] 細胞實驗，關於時間點的問題
時間Wed Apr 27 12:55:52 2016
實驗目的:想觀察SW480經過不同時間的serum stavation(12hr，24hr)
會不會因為時間的長短不同，產生apoptosis現象
參考此文章:因為Western blot ，未經藥物誘導的細胞也有看到cleavage caspase8
而此藥物主要觀察的現象是誘導necrosis，所以想確認是否為實驗過程所誘導的
https://www.researchgate.net/post/How_can_I_do_serum_starvation_for_suspended_
cells
實驗流程:1.細胞分盤等待貼盤時間固定12hr
2.serum stavation 固定12hr & 24hr兩個時間點
3.模擬treated drug 時間 16hr
4.flow cytometry
核心問題:如果我使用不同批cell line，想要觀察時間點的差異，能可以解釋此現象
會因為時間不同而型態有所不同嗎?
例如:甲:A盤直接分B兩個條件的細胞(12hr,24hr)出來，
(困擾的地方，會做很晚)
乙:使用不同盤的細胞，A盤分B(12hr)，C盤分D(24hr)，但實驗條件相同
另外還有個小小的問題:
如果不同種Cell line間想要比較的話，當中serum stavation 時間不同的話
要怎使實驗一致。
**不同的意思是，因為有使用初代細胞，有文獻指出這種細胞serum stavation
過長會漂浮，所以想問看看要怎麼解決，還是在文章裡面標示清楚就好?
文章有點長 感謝大家
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1F：→ blence: 一般seeding都是等24h再進行後續實驗;模擬drug 16hr是為了 04/27 13:04
2F：→ blence: 產生apoptosis？ 一般為了方便都6,8,或24h,是特殊drug嗎？ 04/27 13:05
3F：→ blence: 我的習慣會先試甲,但修改成作息方便的操作條件 04/27 13:07
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※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:29
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:57
4F：→ lackgirl: Seeding後24h是為了讓細胞型態回到正常的狀態嗎? 04/27 14:01
5F：→ lackgirl: 這樣的話細胞數量要怎麼估計 04/27 14:02
6F：→ lackgirl: 之前有用過這株細胞做過WST-1 assay OD值與細胞數的關係 04/27 14:04
7F：→ lackgirl: 條件是用這樣，因為實驗室這株細胞已使用約幾年時間 04/27 14:05
8F：→ lackgirl: 所以有點不確定doubling time會與來源很相近 04/27 14:06
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 15:46:23
9F：推 aaaazzzz: 像我習慣是下午種細胞，隔日上午進行後續處理(如 04/27 16:55
10F：→ aaaazzzz: starvation,加藥等) 04/27 16:55
11F：→ aaaazzzz: 我記得先前starvation時間過長,會發生細胞死亡(顯微鏡) 04/27 16:56
12F：→ aaaazzzz: 但沒有特別去壓caspase 3(要跑12%的膠，有點麻煩) 04/27 16:57
13F：推 qiet: 不太懂做這實驗的目的, 平常用藥物處理的時候不也會有組 04/27 17:31
14F：→ qiet: 對照組嗎, 應該就是serum starvation時間和實驗組相同的 04/27 17:31
15F：→ qiet: DMSO or 其他vehicle control 04/27 17:31
16F：→ lackgirl: 因為control 組也有看到caspase 表現量 04/27 18:25
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:35:20
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:38:00
17F：→ blence: 我也不太懂,不能甲分盤後取normal,12h,24h starved這三盤 04/27 21:27
18F：→ blence: 直接看caspase 8 WB? 04/27 21:28
19F：→ lackgirl: WB 比較費工XD 那我直接還是照原本計畫走好了T^T 04/27 21:51
20F：→ lackgirl: 因為有4個cell line要做 WB會做到暈 04/27 21:52
21F：→ Ice9: 我們是要求這類實驗，細胞要至少過了一次 doubling time 才 04/28 06:54
22F：→ Ice9: 開始。若是初代細胞問題，那就限制所有實驗細胞都是初代的。 04/28 06:55
23F：→ lackgirl: 使用初代的目的是想確認normal cell與cancer cell 04/28 12:23
24F：→ lackgirl: 藥物作用後的差異 04/28 12:23